[發(fā)明專利]重組酵母中的蘋果酸生產(chǎn)無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 200680050452.4 | 申請日： | 2006-11-01 |
| 公開（公告）號： | CN101365782A | 公開（公告）日： | 2009-02-11 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | A·A·溫克勒;A·F·德赫爾斯特;J·P·范迪耶肯;J·T·普隆克 | 申請（專利權(quán)）人： | 泰特&萊爾組分美國公司 |
| 主分類號： | C12N1/00 | 分類號： | C12N1/00;C12N1/16;C12P7/46 |
| 代理公司： | 中國國際貿(mào)易促進(jìn)委員會專利商標(biāo)事務(wù)所 | 代理人： | 李瑛 |
| 地址： | 美國伊*** | 國省代碼： | 美國;US |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 重組 酵母 中的 蘋果酸 生產(chǎn) | ||
1、重組酵母，其中所述酵母是丙酮酸脫羧酶(PDC)活性陰性的 (PDC陰性)，并且用編碼丙酮酸羧化酶(PYC)或磷酸烯醇丙酮酸(PEP) 羧化酶的編碼區(qū)、編碼蘋果酸脫氫酶(MDH)的編碼區(qū)和編碼蘋果酸轉(zhuǎn) 運(yùn)蛋白(MAE)的編碼區(qū)進(jìn)行功能轉(zhuǎn)化，其中PYC在細(xì)胞溶膠中是活性 的，其中PEP羧化酶對蘋果酸、天冬氨酸和草酰乙酸的抑制作用不敏 感，其中MDH在細(xì)胞溶膠中是活性的，并在葡萄糖存在時不失活。
2、權(quán)利要求1的重組酵母，其中所述酵母屬于啤酒糖酵母 (Saccharomyces?cerevisiae)種。
3、權(quán)利要求2的重組酵母，其中所述酵母是啤酒糖酵母TAM菌株。 4、權(quán)利要求1的重組酵母，其中PYC是啤酒糖酵母丙酮酸羧化酶， MDH是啤酒糖酵母MDH1或啤酒糖酵母MDH3，以及MAE是粟酒裂殖酵母 (Schizosaccharomyces?pombe)SpMAE1。
5、權(quán)利要求4的重組酵母，其中通過相對于編碼野生型MDH的編 碼區(qū)修飾編碼MDH的編碼區(qū)，將MDH靶向所述酵母的細(xì)胞溶膠。
6、權(quán)利要求1的重組酵母，其中PYC與SEQ?ID?NO：1具有至少 75％的同一性，MDH與SEQ?ID?NO：2具有至少75％的同一性，MAE與SEQ ID?NO：3具有至少75％的同一性。
7、權(quán)利要求6的重組酵母，其中PYC與SEQ?ID?NO：1具有至少 95％的同一性，MDH與SEQ?ID?NO：2具有至少95％的同一性，MAE與SEQ ID?NO：3具有至少95％的同一性。
8、權(quán)利要求6的重組酵母，其中PYC具有SEQ?ID?NO：1中所示 的序列，MDH具有SEQ?ID?NO：2中所示的序列，MAE具有SEQ?ID?NO： 3中所示的序列。
9、生產(chǎn)蘋果酸的方法，包括：
在包括碳源和二氧化碳源的培養(yǎng)基中培養(yǎng)重組酵母，其中所述酵 母是丙酮酸脫羧酶(PDC)活性陰性的(PDC陰性)，并且用編碼丙酮 酸羧化酶(PYC)或磷酸烯醇丙酮酸(PEP)羧化酶的編碼區(qū)、編碼蘋 果酸脫氫酶(MDH)的編碼區(qū)和編碼蘋果酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(MAE)的編碼區(qū) 進(jìn)行功能轉(zhuǎn)化，其中PYC在細(xì)胞溶膠中是活性的，其中PEP羧化酶對 蘋果酸、天冬氨酸和草酰乙酸的抑制作用不敏感，其中MDH在細(xì)胞溶 膠中是活性的，并在葡萄糖存在時不失活；和
從培養(yǎng)基中分離蘋果酸。
10、權(quán)利要求9的方法，其中所述碳源是葡萄糖。
11、權(quán)利要求9的方法，其中所述酵母屬于啤酒糖酵母種。
12、權(quán)利要求11的方法，其中所述酵母是啤酒糖酵母TAM菌株。
13、權(quán)利要求9的方法，其中所述酵母用編碼啤酒糖酵母丙酮酸 羧化酶的編碼區(qū)、編碼啤酒糖酵母MDH1或啤酒糖酵母MDH3的編碼區(qū) 和編碼粟酒裂殖酵母SpMAE1的編碼區(qū)進(jìn)行功能轉(zhuǎn)化。
14、權(quán)利要求13的方法，其中將MDH靶向所述酵母的細(xì)胞溶膠。
15、權(quán)利要求9的方法，其中所述酵母用編碼與SEQ?ID?NO：1 具有至少75％同一性的PYC的編碼區(qū)，編碼與SEQ?ID?NO：2具有至少 75％同一性的MDH的編碼區(qū)和編碼與SEQ?ID?NO：3具有至少75％同一 性的MAE的編碼區(qū)進(jìn)行功能轉(zhuǎn)化。
16、權(quán)利要求9的方法，其中所述酵母用編碼與SEQ?ID?NO：1 具有至少95％同一性的PYC的編碼區(qū)，編碼與SEQ?ID?NO：2具有至少 95％同一性的MDH的編碼區(qū)和編碼與SEQ?ID?NO：3具有至少95％同一 性的MAE的編碼區(qū)進(jìn)行功能轉(zhuǎn)化。
17、權(quán)利要求16的方法，其中PYC具有SEQ?ID?NO：1中所示的 序列，MDH具有SEQ?ID?NO：2中所示的序列，以及MAE具有SEQ?ID?NO： 3中所示的序列。
18、權(quán)利要求9的方法，進(jìn)一步包括從所述培養(yǎng)基中分離琥珀酸。
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