[發明專利]突變體Ⅱ型β－內酰胺酰化酶

有效

• 申請號: 200680050115.5
• 申請日: 2006-12-28
• 公開（公告）號: CN101351549A
• 公開（公告）日: 2009-01-21
• 發明（設計）人: 簡·米特斯卡·拉恩凡德;理查德·克爾曼;威廉·比杰勒威爾德;比昂卡·吉艾勒森
• 申請（專利權）人: 帝斯曼知識產權資產管理有限公司
• 主分類號: C12N9/80
• 分類號: C12N9/80
• 代理公司: 北京東方億思知識產權代理有限責任公司
• 代理人: 肖善強

1.突變體II型β-內酰胺酰化酶，其是具有II型β-內酰胺酰化酶活性的 模型多肽的變體，其中，

所述突變體β-內酰胺酰化酶較之具有β-內酰胺酰化酶活性的所述模型 多肽而言，針對己二酰-7-ADCA的體外β-內酰胺酰化酶活性提高了至少 1.5倍，以及，

其中，所述突變體II型β-內酰胺酰化酶通過用選自L161T、 L161S+E442G、L161S+H589R、L161G、L161G+E10K、L161S、L161T、 L161T+S29N、L161T+S29N+H274L、L161T+H274L、L161T+I314V、 L161T+V726I、L161T+Y706G、L161T+Y706G+S29N、 L161T+S29N+P514Q、L161T+S29N+H274L+I314Q+N694T、 L161T+S29N+R280Q+I314V+A645T+V726I、 L161T+S29F+H274L+V726I、L161T+H274I+R280Q+I314V、 L161T+H274L+R589H、L161T+H274C+Y760G或 L161S+H274T+R280Q+R514Q+V726I的突變來修飾SEQ?ID?NO：1而獲 得，其中采用了SEQ?ID?NO：1所示的Pseudomonas的SE83-acyII酰化酶的 氨基酸序列的氨基酸位置編號，以及

其中，所述模型多肽是SEQ?ID?NO：1所示的Pseudomonas的SE83- acyII酰化酶。

2.編碼權利要求1所述的突變體II型β-內酰胺酰化酶的多核苷酸。

3.包含權利要求2所述的多核苷酸的表達載體或表達盒。

4.經權利要求2所述的多核苷酸或權利要求3所述的表達載體或表達 盒轉化的宿主細胞。

5.生產權利要求1所述的突變體II型β-內酰胺酰化酶的工藝，所述工 藝包括在有益于生產突變體II型β-內酰胺酰化酶的條件下培養如權利要求 4所述的宿主細胞的步驟，以及可選地，回收所述多肽的步驟。

6.生產脫酰基化β-內酰胺化合物的工藝，所述工藝包括使用權利要求 1所述的突變體II型β-內酰胺酰化酶對β-內酰胺化合物的酰化前體進行脫 酰基化的步驟。

7.如權利要求6所述的工藝，其中，所述脫酰基化β-內酰胺化合物是 6-APA、7-ACA、7-ADCA、7-ADAC或7-氨基-3-氨基甲酰氧甲基-3-頭孢霉 素核-4-羧酸。

8.如權利要求6或7所述的工藝，其中，所述β-內酰胺化合物的酰化 前體具有以二羧酸為酰基基元的酰基。

9.如權利要求6或7所述的工藝，其中，所述突變體II型β-內酰胺酰 化酶以被固定的形式使用。

10.如權利要求1所述的突變體II型β-內酰胺酰化酶用于對β-內酰胺 化合物的酰化前體進行脫酰基化的用途。

11.如權利要求10所述的用途，其中所述β-內酰胺化合物是7-ADCA 或7-ACA。

12.如權利要求10或11所述的用途，其中，所述β-內酰胺化合物的 酰化前體具有以二羧酸為酰基基元的酰基。

13.權利要求10或11所述的用途，其中，所述突變體II型β-內酰胺 酰化酶以被固定的形式使用。