[發(fā)明專利]針對抑制VIII因子的抗體的細胞毒性抗體

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200680049924.4
• 申請日: 2006-11-02
• 公開（公告）號: CN101351226A
• 公開（公告）日: 2009-01-21
• 發(fā)明（設計）人: 克里斯蒂安·貝朗;克里斯蒂娜·戈謝;克里斯托夫·德羅莫夫
• 申請（專利權）人: LFB生物技術公司
• 主分類號: A61K39/395
• 分類號: A61K39/395;A61P7/04
• 代理公司: 北京邦信陽專利商標代理有限公司
• 代理人: 黃澤雄;崔華

技術領域

本發(fā)明涉及針對抑制人VIII因子的抗體的抗獨特型抗體，所述抑制 性抗體靶向人VIII因子的C2區(qū)，所述抗體的每條輕鏈的可變區(qū)的核苷 酸編碼序列與鼠科動物的核苷酸序列SEQ?ID?NO：1具有至少70％的一致 性，所述抗體的每條重鏈的可變區(qū)的核苷酸編碼序列與鼠科動物的核苷 酸序列SEQ?ID?NO：2具有至少70％的一致性，所述抗體的輕鏈恒定區(qū)和 重鏈恒定區(qū)來源于非鼠科種的恒定區(qū)，本發(fā)明還涉及所述抗體在激活細 胞毒免疫細胞的FcγRIII受體，以及生產(chǎn)藥物，特別是用于治療血友病的 藥物中的應用。

背景技術

A型血友病是與X染色體異常連鎖的遺傳性疾病，其導致受損傷之 處血液不能凝集。A型血友病是最常見的影響血液凝集的缺陷癥；在法 國，每5000人中就有1人罹患，其占血友病病人的80％。該病是有關凝 集的蛋白，因子VIII(FVIII)的基因變異所致，其既可以由于血液中完 全缺乏FVIII，也可以是FVIII的部分缺陷。

血友病病人的20％罹患血友病的另一類型，血友病B；其由另一凝 血因子，IX因子的缺陷引起。

當前的血友病治療(A型或B型)包括以靜脈途徑給藥缺陷或缺失 的凝血因子。在法國，意在治療A型血友病病人的FVIII可以以來源于 血液的藥物的形式獲得，所述血液由法國血液分割暨生化制品實驗室 (Laboratoire?Francais?du?Fractionnement?et?des?Biotechnologies)(LFB)或國 際藥物實驗室供應，還可以以來自于基因工程的重組藥物的形式獲得。 事實上，已分離到編碼FVIII的DNA，并已在哺乳動物細胞中表達(Wood 等人，Nature(1984)312：330-337)，并且已根據(jù)cDNA推斷出其氨基酸序 列。

分泌出的FVIII是分子量為300Kda(2332個氨基酸)的糖蛋白，其 在內(nèi)源性凝血通路中扮演重要的角色。無活性的FVIII由六個結構域組 成：從N末端到C末端為，A1(1-372殘基)、A2(373-740殘基)、B(741-1648 殘基)、A3(1690-2019殘基)、C1(2020-2172殘基)和C2(2173-2332 殘基)。分泌后，F(xiàn)VIII與溫韋伯氏因子(von?Willebrand?factor，vWF)相 互作用，vWF保護FVIII不受血漿蛋白酶作用。經(jīng)凝血酶切割后，F(xiàn)VIII 從vWF上解離。切割使B區(qū)被排除，并形成異源二聚體。FVIII以該形 式在血漿中循環(huán)。該異源二聚體由一重鏈(A1、A2)和一輕鏈(A3、C1、 C2)組成。

當將FVIII灌輸入血友病患者體內(nèi)時，其與患者血液循環(huán)中的vWF 結合。激活的FVIII作為激活的IX因子的輔助因子起作用，IX因子加速 X因子到活性X因子的轉換。激活的X因子使凝血酶原轉換成凝血酶。 之后凝血酶使纖維蛋白原轉換成纖維蛋白，并出現(xiàn)凝集。

在給藥FVIII中出現(xiàn)的主要問題是在患者體內(nèi)出現(xiàn)抗FVIII的抗體， 其被稱為“抑制性抗體”。這些抗體中和FVIII的促凝活性，導致當抗體一 經(jīng)灌注，F(xiàn)VIII就被滅活。因此，在能夠抑制出血之前，所應用的凝血因 子就被破壞，其中出血導致了一系列的血友病并發(fā)癥，使治療失去了效 力。而且，某些非遺傳性血友病患者可以產(chǎn)生抗內(nèi)源性FVIII的抑制劑： 其為獲得性的血友病。

研究顯示，抗FVIII免疫應答是多克隆的，主要針對A2和C2結構 域(Gilles?JG等(1993)Blood；82：2452-2461)。為研究FVIII抑制劑的形 成，建立了動物模型；用重組人FVIII免疫的大鼠顯示出快速的多克隆型 的免疫應答(Jarvis等Thromb?Haemost.1996Feb；75(2)：318-25)。

抗FVIII的抑制性抗體干擾FVIII功能的機制有許多，包括干擾FVIII 的蛋白裂解，及干擾FVIII與不同伴侶如vWF、磷脂(PL)、IX因子、 活性X因子(FXa)或APC(活化蛋白C)的相互作用。