[發明專利]用丙炔基修飾的寡核苷酸的改進的靶向核苷酸交換方法

無效

• 申請號: 200680048972.1
• 申請日: 2006-12-20
• 公開（公告）號: CN101346465A
• 公開（公告）日: 2009-01-14
• 發明（設計）人: P·本多克;M·T·J·德博特;R·C·J·霍格斯
• 申請（專利權）人: 凱津公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司
• 代理人: 戈泊

1.用于靶向改變雙鏈受體DNA序列的方法，其包括在存在能靶 向核苷酸交換的蛋白質的情況下，組合雙鏈受體DNA序列和供體寡核 苷酸，其中雙鏈受體DNA序列包含第一DNA序列和作為第一DNA 序列的互補鏈的第二DNA序列，和其中供體寡核苷酸包括域，該域包 括至少一個關于要改變的雙鏈受體DNA序列的錯配，和其中寡核苷酸 包括至少一個區段，所述區段包含至少一個具有比天然存在的A、C、 T或G更高結合親合力的修飾核苷酸，和其中修飾核苷酸與互補于第 一DNA序列的相對位置的核苷酸的天然存在的核苷酸相比更強地結 合在第一DNA序列的相對位置的核苷酸，其中在寡核苷酸中至少50％ 的嘧啶和嘌呤被其丙炔化衍生物取代，其中所述方法不是疾病的診斷 或治療方法，且所述方法不在人類生殖細胞上實施。

2.根據權利要求1所述的方法，其中至少75％的嘧啶和嘌呤被其 相應的丙炔化衍生物替代。

3.根據權利要求1所述的方法，其中至少90％的嘧啶和嘌呤被其 相應的丙炔化衍生物替代。

4.根據權利要求1所述的方法，其中在錯配位置的核苷酸是未修 飾的。

5.根據權利要求1所述的方法，其中至少一個修飾的核苷酸位于 鄰近于錯配。

6.根據權利要求1所述的方法，其中改變在細胞內。

7.根據權利要求6所述的方法，其中細胞選自植物細胞、真菌細 胞、嚙齒類細胞、靈長類細胞、不包括人類胚胎干細胞的人類細胞或 酵母細胞。

8.根據權利要求1所述的方法，其中蛋白質源自細胞提取物。

9.根據權利要求8所述的方法，其中細胞提取物選自植物細胞提 取物、真菌細胞提取物、嚙齒類細胞提取物、靈長類細胞提取物、不 包括人類胚胎干細胞的人類細胞提取物或酵母細胞提取物。

10.根據權利要求1所述的方法，其中改變為至少一個核苷酸的 缺失、取代或插入。

11.根據權利要求6所述的方法，其中細胞為真核細胞、植物細 胞、非人類哺乳動物細胞或不包括人類胚胎干細胞的人類細胞。

12.根據權利要求1所述的方法，其中靶DNA來自真菌、細菌、 植物、非人類哺乳動物或人類。

13.根據權利要求1所述的方法，其中雙鏈DNA來自基因組DNA、 線性DNA、哺乳動物人工染色體、細菌人工染色體、酵母菌人工染色 體、植物人工染色體、核染色體DNA、細胞器染色體DNA、或附加體 DNA。

14.根據權利要求1所述的方法，其用于改變細胞、通過恢復成 野生型校正突變、誘導突變、通過破壞編碼區使酶失活、通過改變編 碼區修飾酶的生物活性、或通過破壞編碼區修飾蛋白質。

15.寡核苷酸用于靶向改變雙鏈受體DNA序列的用途，其中寡核 苷酸包括域，該域包括至少一個關于要改變的雙鏈受體DNA序列的錯 配，和其中寡核苷酸包括至少一個區段，所述區段包含至少一個具有 比天然存在的A、C、T或G更高結合親合力的修飾核苷酸，和其中修 飾核苷酸與互補于第一DNA序列的相對位置的核苷酸的天然存在的 核苷酸相比更強地結合在第一DNA序列的相對位置的核苷酸，其中在 寡核苷酸中至少50％的嘧啶和嘌呤被其丙炔化衍生物取代，其中所述 用途不用于疾病的診斷或治療，且所述用途不用于人類生殖細胞上。

16.如權利要求15所述的用途，用于改變細胞、通過恢復成野生 型校正突變、誘導突變、通過破壞編碼區使酶失活、通過改變編碼區 修飾酶的生物活性、通過破壞編碼區修飾蛋白質、錯配修復、靶向改 變植物遺傳物質包括基因突變、或靶向基因修復和基因替換。

17.如權利要求15的用途用于為植物提供除草劑耐藥性的方法中。