[發(fā)明專利]能夠更好地在醫(yī)療制品中檢測非內毒素致熱污染物的改進的單核細胞活化測試

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200680048872.9
• 申請日: 2006-12-20
• 公開（公告）號: CN101346630A
• 公開（公告）日: 2009-01-14
• 發(fā)明（設計）人: 斯蒂芬·普勒;梅于爾·帕特爾
• 申請（專利權）人: 巴克斯特國際公司;巴克斯特醫(yī)療保健股份有限公司;國家生物標準委員會
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/50
• 代理公司: 中原信達知識產權代理有限責任公司
• 代理人: 楊青;樊衛(wèi)民

發(fā)明領域

總的來說，本發(fā)明涉及能夠在醫(yī)療制品中更好地檢測非內毒素熱 原的改進的單核細胞活化測試，其中樣品與含有單核細胞的反應試劑 孵育在含有至少一個含聚丙烯的表面的分析系統(tǒng)中。本發(fā)明還涉及在 這些測試中使用的分析系統(tǒng)，其包括至少一個微量滴定孔，所述孔具 有至少一個含有聚丙烯的內表面并且具有的形狀使得含有單核細胞的 試劑在孔中集中，以提供更多的細胞進行細胞接觸。本發(fā)明還涉及可 以用于檢測樣品中非內毒素熱原的存在的診斷試劑盒。

發(fā)明背景

當某些化學或生物學化合物與人類或其它哺乳動物的循環(huán)系統(tǒng)相 接觸時，它們引起被稱為炎性反應或炎癥的全身性反應。炎性反應是 保護身體免于感染和/或傷害的防御性機制；炎癥增加了流向感染或受 傷部位的血液，帶去幫助愈合過程的必需的流體、蛋白和白血細胞(白 細胞)。例如，與炎性反應有關的一種癥狀是體溫升高或發(fā)燒，它作 為針對引起過熱的病原的防御機制起作用。炎性反應可以與多種“流 感樣”癥狀有關，包括發(fā)燒、寒戰(zhàn)、疲乏、頭痛、失去食欲和肌肉僵 硬。引發(fā)發(fā)燒的化學或生物學化合物在歷史上被稱為“熱原”或“致 熱”化合物，用于指這些化合物可以引起的發(fā)燒反應。但是，某些化 學的或生物學的化合物一般來說是促炎性的，并會或不會引起發(fā)燒作 為它們引起的炎性反應的一部分。

在某些情況下，根據(jù)個體的敏感性以及個體所暴露的熱原的類型 和濃度，個體可能在暴露于熱原后發(fā)生威脅生命的類似休克的癥狀。 可以被吸入、注射或輸注的醫(yī)療制品，以及醫(yī)療裝置例如膜或植入材 料造成了熱原性的特別風險。即使是營養(yǎng)品也可能表現(xiàn)出熱原性風險。 在醫(yī)療制品和營養(yǎng)品中包含的熱原被稱為外源性熱原；反之，內源性 熱原是免疫系統(tǒng)的信使化合物，介導個體對外源性熱原的炎性反應。 除了制品本身或它的生產中的副產物的致熱性質之外，制品的污染通 常也能引起熱原性。由制品的污染引起的熱原性可以由來自細菌、病 毒、真菌、或甚至來自宿主的多種不同類型的熱原中的任何一種所引 起。即使制品通過加熱或化學方法“滅菌”，這個問題仍然存在；通 常遇到的致熱化合物細菌內毒素(主要由來自革蘭氏陰性細菌細胞壁 的脂多糖(LPS)構成)，在細菌被殺死后可以存留。因此，對用于腸 胃外使用的各種藥物、營養(yǎng)品和醫(yī)療制品進行熱原測試是必要的，以 確保這些制品的安全性。

通常情況下，作為熱原的化合物起到熱原的作用是通過在與組織、 細胞或體液接觸后，刺激單核細胞中的內源性熱原、例如前列腺素和 促炎性細胞因子的產生。正是這些內源性產生的熱原在受影響的生物 體中介導了炎性反應。這些內源熱原中最重要和廣為人知的是細胞因 子白介素-1(IL-1)、白介素-6(IL-6)、白介素-8(IL-8)和腫瘤壞死 因子(TNF)以及低分子量的脂類介質前列腺素E2(PGE2)。這些 化合物通常通過ELISA或稱酶聯(lián)免疫吸附分析(用于IL-1、IL-6或 TNF)和EIA或稱酶法免疫分析(用于PGE2)進行分析。

為了避免任何腸胃外給藥的藥物或藥物制品的致熱反應并確保它 們的安全性，必須對致熱污染進行監(jiān)控，以鑒定被細菌污染物污染的 每個批次。目前常規(guī)用于監(jiān)測批量生產的藥物制品中的熱原污染有兩 種基于動物的藥典(Pharmacopial)方法，鱟阿米巴細胞裂解物測試 (Limulus?amebocyte?lysate(LAL)test)、也被稱為細菌內毒素測試 (BET)，以及兔熱原測試。

兔測試是一種體內測試，由給統(tǒng)計學顯著性數(shù)量的兔注射樣品化 合物并觀察在試驗動物中引起的平均體溫升高而構成。盡管兔測試對 廣譜的致熱劑包括非內毒素熱原具有反應性，但兔測試的靈敏度(ng 內毒素/ml)與其它熱原檢驗(LAL檢驗為pg內毒素/ml)相比相對較 低。此外，物種之間致熱反應與化合物的相關性最多只是近似的。例 如，已經記錄到在物種之間引發(fā)致熱反應的細菌內毒素的劑量變化多 達10,000倍。相對的不靈敏性、定量結果差、兔種類之間的易變性以 及動物試驗所涉及的倫理問題，使得兔測試近年來遭到冷遇。