[發明專利]能夠更好地在醫療制品中檢測非內毒素致熱污染物的改進的單核細胞活化測試

有效

• 申請號: 200680048872.9
• 申請日: 2006-12-20
• 公開（公告）號: CN101346630A
• 公開（公告）日: 2009-01-14
• 發明（設計）人: 斯蒂芬·普勒;梅于爾·帕特爾
• 申請（專利權）人: 巴克斯特國際公司;巴克斯特醫療保健股份有限公司;國家生物標準委員會
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/50
• 代理公司: 中原信達知識產權代理有限責任公司
• 代理人: 楊青;樊衛民

1.在樣品中檢測非內毒素熱原的方法，包括下列步驟：

將含有單核細胞的試劑與待測樣品在分析系統中組合，所述分析 系統包括含有多個微量滴定孔的微量滴定板，所述微量滴定孔的形狀 使得與平底的微量滴定孔相比，含有單核細胞的試劑被集中以提供更 多的細胞與細胞的接觸，其中每個微量滴定孔包含的底壁是非平面的， 并且其中所述微量滴定孔的表面包含聚丙烯涂層或者整個微量滴定孔 由聚丙烯構成；

將含有單核細胞的試劑與樣品孵育，其中的樣品包含熱原，并且 含有單核細胞的試劑產生細胞因子或炎性反應的內源性介質，并且其 中分析系統還包含至少一個用針對細胞因子或炎性反應的內源性介質 的抗體處理過的表面，或者所述方法還包括將分析系統的內含物轉移 到第二分析系統的步驟，所述第二分析系統包含至少一個用針對細胞 因子或炎性反應的內源性介質的抗體處理過的表面；以及

分析分析系統或第二個分析系統中與表面上的抗體結合的細胞因 子或內源性介質的存在，由此與表面結合的細胞因子或內源性介質的 水平升高表明在測試樣品中存在熱原。

2.權利要求1的方法，其中每個微量滴定孔包含的底壁是曲面的、 拋物面的或向下延伸的。

3.權利要求1中的方法，其中每個微量滴定孔的側面是向內傾斜 的。

4.權利要求1中的方法，其中抗體施加在所述微量滴定孔的內部 的至少一部分。

5.權利要求4中的方法，其中所述抗體是針對炎性反應的內源性 介質的抗體。

6.權利要求5中的方法，其中所述內源性介質是內皮素。

7.權利要求1至4任一項中的方法，其中所述細胞因子選自白介 素-1（IL-1）、白介素-1ra（IL-1ra）、白介素-6（IL-6）、白介素-8 （IL-8）和腫瘤壞死因子-α（TNF-α）。

8.權利要求7中的方法，其中所述細胞因子是IL-6。

9.權利要求1至8任一項中的方法，其中所述分析系統是比色的 酶聯免疫吸附分析（ELISA）、放射性標記的免疫分析或熒光標記的免 疫分析。

10.權利要求1中的方法，其中含有單核細胞的試劑包含外周血 單核細胞（PBMCs）或單核細胞系細胞。

11.權利要求10中的方法，其中所述單核細胞系包括人類單核細 胞系。

12.權利要求11中的方法，其中所述單核細胞系包括選自 MONOMAC-6、THP-1和28SC的人類單核細胞系。

13.權利要求10中的方法，其中所述單核細胞系包含具有內源性 CD14和Toll樣受體、或已經被炎性或致熱性介質的CD14和/或Toll 樣受體和/或報告基因轉染的細胞系。

14.權利要求10中的方法，其中所述外周血單核細胞是人類外周 血單核細胞。

15.權利要求10中的方法，其中所述含有單核細胞的試劑以每個 孔至少250,000個細胞的細胞密度存在于所述分析系統中。

16.權利要求15中的方法，其中所述含有單核細胞的試劑以每個 孔至少500,000個細胞的細胞密度存在于所述分析系統中。

17.權利要求16中的方法，其中所述含有單核細胞的試劑以每個 孔至少600,0000個細胞的細胞密度存在于所述分析系統中。

18.權利要求17中的方法，其中所述含有單核細胞的試劑以每個 孔至少700,000個細胞的細胞密度存在于所述分析系統中。

19.權利要求18中的方法，其中所述含有單核細胞的試劑以每個 孔至少800,000個細胞的細胞密度存在于所述分析系統中。

20.權利要求19中的方法，其中所述含有單核細胞的試劑以每個 孔至少900,000個細胞的細胞密度存在于所述分析系統中。