[發明專利]抑制人類免疫缺陷病毒(HIV)感染的方法和組合物

無效

• 申請號: 200680044648.2
• 申請日: 2006-12-08
• 公開（公告）號: CN101317091A
• 公開（公告）日: 2008-12-03
• 發明（設計）人: D·源;K·L·庫亨;J·考德威爾
• 申請（專利權）人: IRM責任有限公司
• 主分類號: G01N33/50
• 分類號: G01N33/50;C12Q1/70
• 代理公司: 北京市中咨律師事務所
• 代理人: 黃革生;隗永良

相關申請的交叉參考

本申請根據U.S.C.35第119(e)條要求享有于2005年12月8日提交的美國臨時專利申請號60/748,759的優先權。為了所有目的，將優先權申請的公開內容在本文整體引入作為參考。

發明領域

本發明一般涉及HIV感染的抑制。更具體地，本發明涉及新的HIV相互作用宿主因子的鑒定，并涉及使用這些宿主因子鑒定抑制HIV感染的新化合物的方法。

發明背景

人類免疫缺陷病毒(HIV)是屬于逆轉錄病毒科的慢病毒。據估計，世界上有多達90％的艾滋病例是通過性接觸和懷孕途徑傳播HIV的。當接觸到傳染性體液(如精液、陰道分泌物或血液)時，這種傳播通過穿過性器官或胎盤粘膜屏障引發。其余的艾滋病例是由于輸入HIV污染的血液、靜脈注射吸毒者共用針頭、在侵入性的過程中意外接觸到HIV污染的體液以及傳染性病毒能夠直接接觸易感性人組織的其它情況。

目前用來治療HIV感染和艾滋病的藥物不能令人滿意。當以有效藥用濃度使用治療HIV感染的普通藥物(如AZT或HIV蛋白酶抑制劑)時，它們的毒性或不良副作用與其抗病毒活性是不相容的。由于病毒基因組的高突變能力，病毒很快就會產生對當前藥物的抵抗性并且在群體中擴散。因此，在本領域中仍然需要更好的用于預防和治療艾滋病和HIV感染的備選化合物和新的治療靶標。本發明解決了這種需要以及其它需要。

發明概述

在一方面，本發明提供了抑制HIV感染的試劑的鑒定方法。這些方法包括篩選受試化合物以鑒定一種或多種調節化合物，所述調節化合物下調由選自表2-4中所列的多核苷酸編碼的HIV相互作用宿主因子的生物學活性或表達水平，然后檢查鑒定到的調節化合物抑制HIV感染的能力。在一些方法中，所使用的HIV相互作用宿主因子是三十四肽重復序列1(IFIT1)、磷脂酰肌醇轉移蛋白α(PITPNα)或者混合譜系激酶3(MLK3)。一些方法使用MLK3，并篩選受試化合物抑制MLK3激酶活性或其表達的能力。

在一些方法中，通過監測報道基因在HIV?LTR啟動子控制下在HIV感染細胞中的表達來檢查調節化合物抑制HIV感染的能力。例如，HIV感染的細胞可以是表達β-半乳糖苷酶報道基因的Hela-CD4-βgal細胞。在一些方法中通過HIV-IIIb病毒株感染細胞。

在一些其它方法中，通過比較接觸調節化合物的人工改造的HIV允許細胞和沒有接觸調節化合物的對照細胞中的HIV復制來檢查調節化合物抑制HIV-1感染的能力。在一些方法中，所使用的HIV允許細胞是Hela-T4-βGal?HIV細胞。在一些方法中，通過p24抗原酶聯免疫吸附測定或反轉錄酶活性測定來監測HIV復制。

在一些其它方法中，通過比較使用化合物處理的宿主細胞和不使用化合物處理的對照宿主細胞中的假病毒產生來檢查化合物抑制HIV感染的能力。在一些方法中，所使用的宿主細胞是293T?HEK細胞。在一些方法中，使用能夠在細胞中產生HIV假病毒的假病毒質粒轉染宿主細胞。

一些篩選方法使用的HIV相互作用宿主因子是酶。在這些方法中，所測定的生物學活性通常是酶活性。一些方法使用的HIV相互作用宿主因子是激酶，如MLK3。

在另一方面，本發明提供了抑制受試者體內HIV感染的方法。這些方法包括對受試者施用包含抑制HIV相互作用宿主因子的生物學活性或表達有效量的化合物的藥物組合物。HIV相互作用因子由選自表2-4中所列的多核苷酸編碼。一些方法中使用抑制三十四肽重復序列1(IFIT1)、磷脂酰肌醇轉移蛋白α(PITPNα)或者混合譜系激酶3(MLK3)的生物學活性或表達的化合物。一些方法中使用的治療化合物抑制MLK3的激酶活性，如K252a或CEP1347。

通過參考說明書和權利要求書的其余部分可以進一步理解本發明的性質和優點。

附圖簡述

圖1顯示無激酶活性的MLK3(K144R)對HIV感染HeLaCD4βgal細胞的影響。使用編碼野生型MLK3、無激酶活性的MLK3(K144R)的cDNA，或者對照質粒以及HIV-LTR控制下的螢光素酶報道基因共轉染細胞，24小時后以HIV-IIIb感染。3天后通過使用Brite?Glo測量螢光素酶活性來評估感染。無激酶活性的突變體不能增加感染，這突出顯示出激酶功能對于從野生型MLK3中觀察到的增加是必需的。數據顯示為相對于陰性對照質粒的增加倍數，并且是四個獨立測定的概括，每種測定重復兩次。