[發明專利]單鏈引物-啟動子-選擇子構建體的IVT的應用

無效

• 申請號: 200680041636.4
• 申請日: 2006-09-21
• 公開（公告）號: CN101589154A
• 公開（公告）日: 2009-11-25
• 發明（設計）人: 邁克爾·休;娜塔莉亞·科澤瓦
• 申請（專利權）人: 佰爾瑞溶液有限公司
• 主分類號: C12P19/34
• 分類號: C12P19/34
• 代理公司: 北京安信方達知識產權代理有限公司
• 代理人: 楊淑媛;鄭 霞

1.一種用于檢測樣品中靶標子序列的存在或相對量的引物-啟動子- 選擇子構建體，其包括以下三個子序列：

與所述靶標子序列互補的引物子序列，其5’末端與啟動子子序列3’ 末端相鄰，所述啟動子子序列能夠引導選擇子子序列的轉錄，所述選擇子 子序列3’末端與所述啟動子子序列的5’末端相鄰，其中所述選擇子子序列 和其互補序列被設計為不與所述樣品中預期存在的任何子序列退火。

2.如權利要求1的構建體，其中所述啟動子不引導所述引物子序列 的轉錄。

3.如權利要求1的構建體，其中所述啟動子為T7或T3或SP6啟動 子子序列。

4.如權利要求1的構建體，其中所述引物子序列能與模板退火和延 伸。

5.如權利要求1的構建體，其包括可識別的標簽。

6.如權利要求1的構建體，其中所述選擇子子序列作為體外轉錄的 模板。

7.一種試劑盒，其包括：多種不同類型的引物-啟動子-選擇子構建體 和一組寡核苷酸，

其中所述構建體各自用于檢測樣品中不同靶標子序列的存在或相對 量，所述構建體各自包括以下三個子序列：與所述靶標子序列互補的引物 子序列，其5’末端與啟動子子序列3’末端相鄰，所述啟動子子序列能夠引 導選擇子子序列的轉錄，所述選擇子子序列3’末端與所述啟動子子序列的 5’末端相鄰；

其中具有不同序列的所述寡核苷酸展示在不同編碼的微顆粒上，并且 其中所述寡核苷酸能夠與所述選擇子子序列的轉錄產物退火。

8.如權利要求7的試劑盒，其中所述不同類型的構建體各自的引物 子序列和選擇子子序列不同。

9.如權利要求8的試劑盒，其中每個類型的構建體有不同的引物子 序列和相同的選擇子子序列。

10.如權利要求7的試劑盒，其還包括能夠摻入所述轉錄產物的經標 記的NTP。

11.如權利要求10的試劑盒，其中所述NTP是光學標記的。

12.如權利要求7的試劑盒，其中所述啟動子為T7或T3或SP6啟動 子子序列(模板鏈)。

13.如權利要求12的試劑盒，其還包括能夠與所述T7、T3或SP6啟 動子子序列形成雙鏈體的非模板T7、T3或SP6啟動子子序列。

14.如權利要求7的試劑盒，其還包括一組不同編碼的微顆粒，所述 微顆粒適合結合不同類型的與所述轉錄產物互補的寡核苷酸。

15.如權利要求7的試劑盒，其還包括一組經標記的ddNTP或dNTP， 所述經標記的ddNTP或dNTP被設計用于在所述引物子序列延伸時摻入延 伸產物。

16.如權利要求7的試劑盒，其還包括半抗原標記的ddNTP或dNTP。

17.如權利要求16的試劑盒，其還包括磁性顆粒。

18.如權利要求7的試劑盒，其還包括能夠與所述樣品中子序列退火 的寡核苷酸，該寡核苷酸定位至引物的靶向子序列的3’端或定位至所述引 物。

19.如權利要求18的試劑盒，其中所述寡核苷酸是經標記的。

20.如權利要求18的試劑盒，其中所述寡核苷酸包括所述啟動子子 序列。