[發明專利]多重指向性免疫層析分析

無效

• 申請號: 200680034491.5
• 申請日: 2006-08-17
• 公開（公告）號: CN101300490A
• 公開（公告）日: 2008-11-05
• 發明（設計）人: 保羅·C·哈利斯;布萊恩·G·理查斯
• 申請（專利權）人: 反應生醫公司
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558
• 代理公司: 北京中原華和知識產權代理有限責任公司
• 代理人: 壽寧

相關申請案

本申請案主張2005年8月23日申請的美國臨時申請案第60/710,582 號的權益。上述申請案的整個教示內容都并入本文用作參考。

背景技術

流體樣本、尤其是體液樣本中細胞和分析物的定量分析通常會為醫師 和患者提供重要的診斷和治療信息。定量免疫分析是利用抗原(Ag)-抗體 (Ab)反應的特異性來檢測和量化樣本中的Ag或Ab。在固相免疫分析中， 將一種試劑(例如，Ag或Ab)附著于固體表面，從而促進已結合的試劑 或分析物與游離試劑或分析物的分離。將固相暴露于含有與Ag或Ab結合 的分析物的樣本；量化此結合的程度以便測量樣本中的分析物濃度。然而， 將結合事件轉換成可測量信號受到多種因素限制，其中包括由顆粒在固相 上移動的限制，這會影響定量免疫分析的特異性和適用性。

發明內容

本發明涉及使用固相分析法(例如，夾心免疫分析或抑制免疫分析) 測量流體樣本中所關注分析物的量的方法，其中將所關注分析物和捕捉劑 用作特異性結合對的部分；還涉及用于所述方法的套組。

在本發明的方法中，提供一種固相裝置，其包括具有施加點、一個或 一個以上樣本捕捉區(一個與各所關注分析物對應)和控制捕捉區的膜； 所述樣本捕捉區和所述控制捕捉區與所述施加點大致等距(例如，彼此平 行或放射狀分散)。樣本捕捉劑(例如，與所關注分析物結合的試劑，諸如 所關注分析物的抗體)被吸附于各所關注分析物的樣本捕捉區。控制捕捉 劑(例如，與分析物結合性顆粒結合的試劑，諸如抗免疫球蛋白抗體)被 吸附于控制捕捉區。還提供一種樣本收集裝置，其含有以穩定形式儲存的 顆粒群，諸如脂質體、膠體金或有機聚合物乳膠粒子。

在本發明的夾心免疫分析中，所述顆粒為涂有針對所關注分析物的結 合劑(例如，抗體)或者涂有針對多種所關注分析物的結合劑的分析物結 合性顆粒；或者，利用各自涂有針對一種所關注分析物的結合劑的不同分 析物結合性顆粒群。在競爭分析或抑制分析中，顆粒為涂有所關注分析物 或者涂有多種所關注分析物的“分析物涂覆”顆粒；或者，利用各自涂有一種 所關注分析物的不同分析物涂覆顆粒群。在任一類分析中，都可使用比色 標記、熒光標記、發光標記、化學發光標記或其它適當標記來對顆粒做標 記以便于檢測。

在所述方法的一個具體態樣中，將待評定一種或一種以上分析物的流 體樣本引入樣本收集裝置中，并且隨后將緩沖液引入混合流體樣本中。在 所述方法的另一個具體態樣中，將緩沖液引入樣本收集裝置中，并且隨后 引入待評定所關注分析物的流體樣本。在所述方法的第三個具體態樣中， 通過將固體引入緩沖液中來形成流體樣本，并且隨后將流體樣本引入樣本 收集裝置中。在這些具體態樣的任一具體態樣中，都產生含有所述顆粒的 緩沖混合流體樣本。

在夾心分析中，樣本中的所關注分析物與分析物結合性顆粒之間存在 相互作用，從而在混合流體樣本內產生接觸的分析物結合性顆粒。將緩沖 混合流體樣本施加到固相裝置中膜的施加點上。隨后將固相裝置維持在一 定條件下以能使流體通過毛細作用將顆粒輸送到并通過樣本捕捉區，并且 同時輸送到并通過控制捕捉區。樣本捕捉劑與接觸的分析物結合性顆粒相 互作用，從而將顆粒阻滯在樣本捕捉區中。

流體的毛細作用還不僅使接觸的分析物結合性顆粒移動到并通過樣本 捕捉區，而且同時也使其移動到并通過控制捕捉區，在所述控制捕捉區中， 所述顆粒將與控制捕捉劑結合。流體的毛細作用繼續使剩余未結合的顆粒 移動通過樣本捕捉區和控制捕捉區(例如，進入芯吸墊中)。然后測定被阻 滯在各樣本捕捉區和控制捕捉區中的分析物結合性顆粒的量。

接著測定流體樣本中所關注分析物的量。舉例來說，流體樣本中所關 注分析物的量可以1)被阻滯在與所述所關注分析物對應的樣本捕捉區中的 分析物結合性顆粒的量與2)控制捕捉區中分析物結合性顆粒的量的比率測 定。或者，流體樣本中所關注分析物的量可以1)被阻滯在與所述所關注分 析物對應的樣本捕捉區中的分析物結合性顆粒的量與2)控制捕捉區中分析 物結合性顆粒的量和被阻滯在所述所關注分析物的樣本捕捉區中的分析物 結合性顆粒的量的總和的比率測定。