[發(fā)明專利]制備蛋白酶活性降低的含轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶制品的方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200680031211.5
• 申請(qǐng)日: 2006-08-29
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101248176A
• 公開(kāi)（公告）日: 2008-08-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 石田力也;中越裕行
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 味之素株式會(huì)社
• 主分類號(hào): C12N9/10
• 分類號(hào): C12N9/10;A23L1/32;A23J3/14;A23L1/325;A23L1/00;A23L1/328;A23L1/314
• 代理公司: 中國(guó)專利代理(香港)有限公司
• 代理人: 劉冬;劉玥

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及蛋白酶活性降低的含轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶制品及其制備方法。更具體的說(shuō)，本發(fā)明涉及降低在含轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶制品中作為雜質(zhì)存在的蛋白酶的活性的方法。本發(fā)明還涉及由蛋白酶活性降低的含轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶制品及另外的成分所組成的轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶制劑，并涉及應(yīng)用轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶制劑制備食物的方法。

技術(shù)背景

轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶這種酶物質(zhì)已知能修飾含蛋白質(zhì)材料的物理特性。它直接被添加到含蛋白質(zhì)材料中以修飾其物理特性，或者將它與含蛋白質(zhì)材料特別是明膠和乳蛋白質(zhì)溶液混合，作為粘結(jié)組合物應(yīng)用于各種物質(zhì)中。但是，用現(xiàn)有的含轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶制品特別是源自微生物的含轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶制品制備的轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶制劑，和其它的酶制劑一樣各批次之間質(zhì)量相差很大。

各批次轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶制劑間在含蛋白質(zhì)材料中的有效性的差異，其主要原因據(jù)認(rèn)為在于含轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶制品中的轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶活性的差異。但是，即使對(duì)轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶活性進(jìn)行控制，質(zhì)量上的差異仍會(huì)存在，這構(gòu)成一個(gè)重大的操作問(wèn)題。

與起到使蛋白質(zhì)分子發(fā)生交聯(lián)和聚合的作用的轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶相反的是，蛋白酶起到降解蛋白質(zhì)的作用。由于蛋白酶對(duì)蛋白質(zhì)作用的方式與轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶相反，蛋白酶在含轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶制品中作為雜質(zhì)而存在，這被認(rèn)為在含轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶制品和其中這種制品作為原料摻合的轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶制劑中是不合需要的。但是，目前尚未知有方法能選擇性地和有效地僅滅活或清除蛋白酶活性而又不減少轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶活性。

因此，為保持轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶制劑的質(zhì)量需要采用這樣的對(duì)策，即通過(guò)測(cè)試和增加含轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶制品相對(duì)于所存在的蛋白酶活性的摻合比例，來(lái)選出低蛋白酶活性的含轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶制品。這些對(duì)策造成人工成本和原料成本增加，從而大大抬高了制備轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶制劑的成本。

因此，需要有一種能選擇性地僅滅活含轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶制品中存在的蛋白酶而又不損及轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶活性的技術(shù)。

通常，控制含轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶制品中的蛋白酶的活性的各種方法都包括處理，所述處理能選擇性地滅活含轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶制品中的蛋白酶或者選擇性地將蛋白酶從含轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶制品中清除。具體的說(shuō)，通過(guò)化學(xué)處理如用抑制劑使蛋白酶停止發(fā)揮作用，是解決這個(gè)問(wèn)題的基本手段。

已知在37℃、pH9.8下處理16小時(shí)能消除蛋白酶和α-淀粉酶之類的雜質(zhì)的酶活性(專利文獻(xiàn)1)，這是一種選擇性地滅活蛋白酶而又不影響耐鹽谷氨酰胺酶形式的特定酶的方法。

但是，與這種已知對(duì)堿性極其穩(wěn)定的酶(谷氨酰胺酶)不同的是，之前不知道轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶進(jìn)行相同的堿處理是否也能選擇性地僅滅活所含的蛋白酶而又不損及轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶活性。

此外，通過(guò)γ射線輻照滅活乳糖酶中所含的蛋白酶的方法，已知能降低蛋白酶活性(專利文獻(xiàn)2)。但是，仍不清楚這種輻照處理是否可作為一種選擇性地滅活含轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶制品中的蛋白酶的手段加以應(yīng)用。也不清楚用這種處理所實(shí)現(xiàn)的蛋白酶活性下降與轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶對(duì)含蛋白質(zhì)材料的作用效果的相關(guān)程度如何。此外，輻照處理的使用具有極低的商業(yè)價(jià)值。

專利文獻(xiàn)1

日本專利申請(qǐng)公開(kāi)說(shuō)明書(shū)第H11-42086號(hào)。

專利文獻(xiàn)2

日本專利申請(qǐng)公開(kāi)說(shuō)明書(shū)第S51-76459號(hào)。

發(fā)明公開(kāi)內(nèi)容

本發(fā)明的一個(gè)目標(biāo)是提供一種能夠降低含轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶制品中存在的蛋白酶而又不降低轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶活性的處理方法。

本發(fā)明的另一個(gè)目標(biāo)是提供一種制備其中蛋白酶活性已用上述處理方法降低的含轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶制品的方法。

本發(fā)明的又一個(gè)目標(biāo)是提供一種其中蛋白酶活性已用上述處理方法降低的含轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶制品。

本發(fā)明的又一個(gè)目標(biāo)是提供一種當(dāng)中摻合有蛋白酶活性已用上述處理方法降低的含轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶制品的轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶制劑。

本發(fā)明的又一個(gè)目標(biāo)是提供一種應(yīng)用這樣的轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶制劑來(lái)制備食物的方法，所述轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶制劑當(dāng)中摻合有蛋白酶活性已用上述處理方法降低的含轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶制品。

“TG”應(yīng)被用作本發(fā)明轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶的縮寫，除非另有具體規(guī)定。

本發(fā)明涵蓋以下具體發(fā)明方案。

(1)一種通過(guò)處理制備蛋白酶活性降低的含轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶制品的方法，所述處理包括將其中蛋白酶作為雜質(zhì)存在的含轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶制品在pH大于9.0但小于13.0、溫度0℃或以上但小于50℃下保持10分鐘或以上但不超過(guò)60小時(shí)。

(2)一種根據(jù)(1)的制備含轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶制品的方法，其中所述處理繼續(xù)進(jìn)行至含轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶制品中的蛋白酶活性/轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶活性之比達(dá)到0.00024或以下。