[發(fā)明專利]使用來自臍帶血的基質(zhì)細(xì)胞將來自臍帶血的有核細(xì)胞增量(expanding)及移植(engrafting)的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200680021976.0
• 申請日: 2006-04-19
• 公開（公告）號: CN101310007A
• 公開（公告）日: 2008-11-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: I·麥克尼斯;J－F·王
• 申請（專利權(quán)）人: 約翰·霍普金斯大學(xué)
• 主分類號: C12N5/00
• 分類號: C12N5/00
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 戈泊

1.一種用于培養(yǎng)來自臍帶血(UCB)的有核細(xì)胞的方法，其包括：

制備包括該有核細(xì)胞與來自臍帶血的黏附性基質(zhì)細(xì)胞的共培養(yǎng)，其中該有核細(xì)胞與該黏附性基質(zhì)細(xì)胞是各別加入該共培養(yǎng)中。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中該有核細(xì)胞包括未成熟或成熟細(xì)胞。

3.如權(quán)利要求2所述的方法，其中該未成熟細(xì)胞包括祖細(xì)胞。

4.如權(quán)利要求2所述的方法，其中該成熟細(xì)胞選自粒細(xì)胞、嗜中性白細(xì)胞、巨核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞以及紅細(xì)胞。

5.如權(quán)利要求1所述的方法，其中該有核細(xì)胞選自CD34^-細(xì)胞、CD34⁺細(xì)胞或Lin^-細(xì)胞。

6.如權(quán)利要求1所述的方法，其中該黏附性基質(zhì)細(xì)胞包括間充質(zhì)干細(xì)胞。

7.如權(quán)利要求1所述的方法，其中該方法產(chǎn)生相較于沒有該黏附性基質(zhì)細(xì)胞的有核細(xì)胞的培養(yǎng)所出現(xiàn)的有核細(xì)胞的數(shù)目而言較大數(shù)目的有核細(xì)胞。

8.如權(quán)利要求6所述的方法，其中該間充質(zhì)干細(xì)胞是非限制性體干細(xì)胞(USSCs)。

9.如權(quán)利要求8所述的方法，其中該非限制性體干細(xì)胞特征為CD13⁺、CD29⁺、CD90⁺、CD105⁺、CD166⁺、SH2⁺、SH3⁺、SH4⁺、CD45^-、CD34^-以及CD14^-。

10.如權(quán)利要求9所述的方法，其中該非限制性體干細(xì)胞進(jìn)一步具有表達(dá)細(xì)胞外基質(zhì)蛋白，且缺乏表達(dá)透明質(zhì)酸合成酶與纖維調(diào)節(jié)素的特征。

11.如權(quán)利要求1所述的方法，其中該有核細(xì)胞或是該黏附性基質(zhì)細(xì)胞是從臍帶血中分離取得或是由從臍帶血中分離取得的細(xì)胞衍生而來。

12.如權(quán)利要求1所述的方法，其中于該培養(yǎng)前，該有核細(xì)胞或是該黏附性基質(zhì)細(xì)胞是實質(zhì)上從其它細(xì)胞種類中分離出。

13.如權(quán)利要求3所述的方法，其中該祖細(xì)胞為造血干細(xì)胞。

14.如權(quán)利要求13所述的方法，其中該造血干細(xì)胞包括至少40％的該祖細(xì)胞。

15.如權(quán)利要求13所述的方法，其中該祖細(xì)胞包括CD34^-且Lin^-細(xì)胞。

16.如權(quán)利要求15所述的方法，其中該CD34⁺且Lin^-細(xì)胞包括至少40％的該祖細(xì)胞。

17.如權(quán)利要求1所述的方法，其中該有核細(xì)胞或該黏附性基質(zhì)細(xì)胞為人類細(xì)胞。

18.如權(quán)利要求1所述的方法，其中相較于沒有與黏附性基質(zhì)細(xì)胞一起培養(yǎng)至少一天的有核細(xì)胞的增量，當(dāng)該黏附性基質(zhì)細(xì)胞與該有核細(xì)胞一起培養(yǎng)至少一天，該共培養(yǎng)增加該有核細(xì)胞的增量為2倍。

19.如權(quán)利要求18所述的方法，其中該共培養(yǎng)增加該有核細(xì)胞的增量為10倍。

20.如權(quán)利要求19所述的方法，其中該共培養(yǎng)增加該有核細(xì)胞的增量為100倍。

21.如權(quán)利要求20所述的方法，其中該共培養(yǎng)增加該有核細(xì)胞的增量為1000倍。

22.如權(quán)利要求21所述的方法，其中該共培養(yǎng)增加該有核細(xì)胞的增量為1,000,000倍。

23.如權(quán)利要求3所述的方法，其中于該共培養(yǎng)后，轉(zhuǎn)移該祖細(xì)胞至另外的培養(yǎng)基中，并于產(chǎn)生分化成為預(yù)先決定細(xì)胞種類的條件下培養(yǎng)。

24.如權(quán)利要求1所述的方法，其中是于該共培養(yǎng)前增量該黏附性基質(zhì)細(xì)胞。

25.如權(quán)利要求1所述的方法，其中可于該共培養(yǎng)前增量該有核細(xì)胞。

26.如權(quán)利要求1所述的方法，其中該培養(yǎng)是發(fā)生于至少一種細(xì)胞因子存在下。