[發(fā)明專利]使用來自臍帶血的基質(zhì)細(xì)胞將來自臍帶血的有核細(xì)胞增量(expanding)及移植(engrafting)的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200680021976.0
• 申請日: 2006-04-19
• 公開（公告）號: CN101310007A
• 公開（公告）日: 2008-11-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: I·麥克尼斯;J－F·王
• 申請（專利權(quán)）人: 約翰·霍普金斯大學(xué)
• 主分類號: C12N5/00
• 分類號: C12N5/00
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 戈泊

相關(guān)申請案

本申請主張于2005年4月19日申請，案號為60/673,014且案名為「臍帶血單核細(xì)胞的活體外增量」以及于2005年6月30日申請，案號為60/695,506且案名為「使用來自臍帶血的基質(zhì)細(xì)胞將來自臍帶血的有核細(xì)胞增量及移植(engraft)的方法」的美國臨時申請案的優(yōu)先權(quán)，且借著參考這兩篇的全部內(nèi)容，將其整合于此。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明關(guān)于一種利用來自臍帶血的貼附性基質(zhì)細(xì)胞以促使同樣由臍帶血中取得的有核細(xì)胞的增量及移植物移入(engraftment)。

背景技術(shù)

一些美國專利，諸如美國專利5,486,359號、5,591,625號、5,736,396號、5,811,0949號、5,827,740號、5,837,539號、5,908,782號、5,908,784號、5,942,225號、5,965,436號、6,010,696號、6,022,540號、6,087,113號、5,858,390號、5,804,446號、5,846,796號、5,654,186號、6,054,121號、5,827,735號以及5,906,934號揭露可將間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal?stem?cell，MSC)分化成數(shù)種祖細(xì)胞，例如肌肉祖細(xì)胞、結(jié)締組織細(xì)胞的祖先或是肝卵圓細(xì)胞。肌肉祖細(xì)胞進(jìn)一步分化成心臟、骨骼和平滑肌，而結(jié)締組織細(xì)胞的祖先可分化成骨骼。

當(dāng)移植(transplanted)到胎羊中時，成人的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植(engraft)到許多的器官中，且其隨著組織特異體系進(jìn)行分化。在動物模式中，在共移植(co-transplantation)后它們會增加供給者造血細(xì)胞的移植物移入(engraftment)，且在免疫缺乏小鼠中，它們會遷移到肌肉退化區(qū)域以進(jìn)行肌肉分化。在人類，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞已用于骨髓摧毀性治療后，以再生骨髓微環(huán)境。

美國申請案09/985,335號(于此并入?yún)⒖?揭露已知為非限制性體干細(xì)胞(unrestricted?somatic?stem?cells，USSCs)的體干細(xì)胞，其可從人體臍帶血、胎盤血以及/或是新生兒的血中取得。非限制性體干細(xì)胞不同于但是可以分化成間充質(zhì)干或是祖細(xì)胞、造血體系干或是祖細(xì)胞、神經(jīng)干或是祖細(xì)胞、或是內(nèi)皮干或是肝祖細(xì)胞。非限制性體干細(xì)胞扮演造血體系的祖細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞以及神經(jīng)干細(xì)胞。這個獨特的多功能可能性，以及于不同分化條件下將這些細(xì)胞增量成不論是仍維持為干細(xì)胞或是作為定型細(xì)胞的技術(shù)，將允許這些細(xì)胞的精確特性化、標(biāo)準(zhǔn)化以及應(yīng)用，以用于再生醫(yī)學(xué)中的制造以及干細(xì)胞治療的實施。

發(fā)明內(nèi)容

我們已確認(rèn)存在于臍帶血(umbilical?cord?blood，UCB)中的黏附性基質(zhì)細(xì)胞可用于支持同樣出現(xiàn)于臍帶血中的有核細(xì)胞的增量。我們也已確認(rèn)從臍帶血取得的黏附性基質(zhì)細(xì)胞也可用于增加需要有核細(xì)胞移植的患者對得自臍帶血的有核細(xì)胞的移入(engraftment)。

因此，本發(fā)明的第一方向，其特征在于培養(yǎng)來自臍帶血的有核細(xì)胞的方法，其涉及制備包含有核細(xì)胞與黏附性基質(zhì)細(xì)胞的共培養(yǎng)，其中有核細(xì)胞與黏附性基質(zhì)細(xì)胞都是取自臍帶血，且有核細(xì)胞與黏附性基質(zhì)細(xì)胞分別添加到該共培養(yǎng)中。

于第一方向的一個實施例中，所述方法也可包含在培養(yǎng)有核細(xì)胞與黏附性基質(zhì)細(xì)胞的同時、培養(yǎng)期間間歇地，或是在培養(yǎng)之后，將生長培養(yǎng)基接觸一種選擇成份，以選出有核細(xì)胞或是黏附性基質(zhì)細(xì)胞，其中該選擇成份包含多種選擇性分子，其對有核細(xì)胞或是黏附性基質(zhì)細(xì)胞具有特定的親和性。

本發(fā)明的第二方向，其特征在于增加一受試者體內(nèi)供給者有核細(xì)胞的移植物移入(engraftment)的方法，其通過對該受試者投藥一個具有來自臍帶血的有核細(xì)胞以及來自臍帶血的黏附性基質(zhì)細(xì)胞的組合物。

于本發(fā)明的第一與第二方向的一實施例中，有核細(xì)胞包含諸如祖細(xì)胞(亦即造血干細(xì)胞)的不成熟細(xì)胞，或是諸如粒細(xì)胞、嗜中性白細(xì)胞、巨核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞以及紅細(xì)胞的成熟細(xì)胞。有核細(xì)胞也可選自CD34^-細(xì)胞、CD34⁺細(xì)胞以及Lin^-細(xì)胞。在一較佳實施例中，有核細(xì)胞為CD34⁺，Lin^-細(xì)胞。在另一較佳實施例中，有核細(xì)胞為約占共培養(yǎng)40％的造血干細(xì)胞。