[發明專利]蛋白糖基化

無效

• 申請號: 200680020096.1
• 申請日: 2006-04-06
• 公開（公告）號: CN101198619A
• 公開（公告）日: 2008-06-11
• 發明（設計）人: 本杰明·居伊·戴維斯
• 申請（專利權）人: ISIS創新有限公司
• 主分類號: C07K1/107
• 分類號: C07K1/107
• 代理公司: 中原信達知識產權代理有限責任公司
• 代理人: 楊青;樊衛民

1.一種蛋白糖基化的方法，其中所述方法包括以下步驟：

i)修飾蛋白以包括炔基和/或疊氮基；和

ii)在Cu(I)催化劑存在條件下，將(i)中修飾的蛋白與

(a)修飾的包括疊氮基的糖基；和/或

(b)修飾的包括炔基的糖基

反應。

2.權利要求1所述的方法，其中蛋白修飾涉及用一個或多個非天然氨基酸類似物取代蛋白的一個或多個氨基酸。

3.權利要求2所述的方法，其中非天然氨基酸類似物是甲硫氨酸類似物。

4.權利要求3所述的方法，其中甲硫氨酸類似物是高炔丙基甘氨酸或者疊氮基高丙氨酸。

5.權利要求1所述的方法，其中蛋白包括多于10個氨基酸。

6.權利要求5所述的方法，其中蛋白包括10到1000個氨基酸。

7.權利要求1所述的方法，其中蛋白分子量大于10kDa。

8.權利要求7所述的方法，其中蛋白分子量在10到100kDa之間。

9.權利要求1到4中任意一項所述的方法，其中蛋白選自糖蛋白，血液蛋白，激素，酶，受體，抗體，白介素和干擾素。

10.權利要求9所述的方法，其中蛋白是激素。

11.權利要求10所述的方法，其中激素是紅細胞生成素。

12.前述權利要求中任意一項所述的方法，其中蛋白修飾(步驟i)還包括修飾蛋白以包括硫醇基的步驟。

13.權利要求12所述的方法，其中通過在蛋白的氨基酸序列中插入半胱氨酸殘基而引入硫醇基。

14.一種蛋白糖基化的方法，所述方法包括以下步驟：

i)(a)修飾蛋白以包括炔基和/或疊氮基；和

(b)在(a)中的蛋白修飾之前或者之后，任選修飾蛋白以包括硫醇基；和

ii)在與硫醇-選擇性的糖類試劑(d)反應之前或者之后，在Cu(I)催化劑存在條件下，將(i)中修飾的蛋白與糖基(c)順序反應

(c)修飾以包括疊氮基的糖基，和/或修飾以包括炔基的糖基；和

(d)硫醇-選擇性的糖類試劑。

15.權利要求14所述的方法，其中硫醇-選擇性糖類試劑是與蛋白中的硫醇基反應以通過二硫鍵引入與蛋白連接的糖基殘基的試劑。

16.權利要求15所述的方法，其中硫醇選擇性糖類試劑是糖基磺酰硫代試劑。

17.權利要求16所述的方法，其中糖基磺酰硫代試劑是糖基甲磺酰硫代試劑。

18.權利要求15所述的方法，其中硫醇-選擇性糖類試劑是糖基硫化硒基試劑。

19.前述權利要求中任意一項所述的方法，其中Cu(I)催化劑選自CuBr和CuI。

20.權利要求19所述的方法，其中Cu(I)催化劑是Cu(I)Br。

21.權利要求19或者20所述的方法，其中Cu(I)催化劑在起穩定作用的胺配體存在的條件下提供。

22.權利要求21所述的方法，其中配體是三三唑基胺配體。

23.化學式(III)所示的蛋白

其中a和b是0到5之間的整數；p和q是1到5之間的整數。

24.按照權利要求1到22中任意一項的方法糖基化的蛋白。

25.化學式(IV)所示的糖基化蛋白

其中t是1到5之間的整數；而隔離物，它可以是不存在的，是具有1到8個C原子的脂肪族部分。

26.權利要求25所述的糖基化蛋白，其中間隔物選自C_1-6烷基和C_1-6雜烷基。

27.權利要求26所述的糖基化蛋白，其中間隔物選自甲基、乙基和CH₂(X)_y，其中X是O、N或者S，y是0或者1。