[發明專利]用于純化抗體的方法

有效

• 申請號: 200680017966.X
• 申請日: 2006-05-23
• 公開（公告）號: CN101180317A
• 公開（公告）日: 2008-05-14
• 發明（設計）人: R·法爾肯施泰因;B·科爾布;M·西博爾德
• 申請（專利權）人: 弗·哈夫曼－拉羅切有限公司
• 主分類號: C07K16/00
• 分類號: C07K16/00;G01N30/34;C07K1/18
• 代理公司: 北京市中咨律師事務所
• 代理人: 黃革生;凌立

1.用于純化免疫球蛋白的方法，其中所述方法包括：

a)提供包含免疫球蛋白、緩沖物質和任選的鹽的溶液；

b)在免疫球蛋白借以與弱離子交換材料結合的條件下，使溶液與所述弱離子交換材料接觸；

c)通過使用包含緩沖物質和鹽的溶液，以單步驟從弱離子交換材料回收免疫球蛋白。

2.根據權利要求1的方法，其特征在于弱離子交換材料是弱陽離子交換材料。

3.根據權利要求1或2的方法，其特征在于緩沖物質是檸檬酸或其鹽，或磷酸或其鹽。

4.根據權利要求1至3中任一項的方法，其特征在于所述方法是層析法或分批法。

5.根據權利要求1至4中任一項的方法，其特征在于步驟c)中的鹽選自氯化鈉、硫酸鈉、氯化鉀、硫酸鉀、檸檬酸鹽、磷酸鹽以及這些成分的混合物。

6.根據權利要求1至5中任一項的方法，其特征在于免疫球蛋白是免疫球蛋白G類或E類的成員。

7.根據權利要求1至6中任一項的方法，其特征在于回收步驟c)中的溶液具有pH3.0至pH7.0的pH值。

8.用于確定在單步驟純化法中從離子交換層析材料洗脫多肽的鹽濃度的方法，其包括以下兩個步驟：

a)步驟1包括下列亞步驟：

a1)提供包含多肽、緩沖物質和任選的鹽的溶液；

a2)在多肽借以與離子交換材料結合的條件下，使包含所述多肽的溶液的第1等分試樣與所述離子交換材料接觸；

a3)通過使用包含緩沖物質和鹽的溶液從離子交換材料回收多肽，其中所述鹽的濃度線性增加；

a4)確定當多肽的第1級分開始從離子交換柱上洗脫時鹽的起始濃度；

b)步驟2包括下列亞步驟：

b1)在多肽借以與離子交換材料結合的條件下，使包含所述多肽的溶液的第2等分試樣與所述離子交換材料接觸；

b2)通過使用三步洗脫方法從離子交換材料回收多肽，其中

i)將第1洗脫步驟的鹽濃度計算為下列的總和：

步驟a4)中確定的起始鹽濃度與所述鹽分子式中所示的非氫單價陽離子總數的乘積，以及

緩沖鹽的濃度與所述緩沖鹽分子式中所示的非氫單價陽離子總數的乘積；

ii)第2洗脫步驟的鹽濃度是第1洗脫步驟的鹽濃度與1.25和1.35之間的因子的乘積；

iii)第3洗脫步驟的鹽濃度是第1洗脫步驟的鹽濃度與1.50和1.70之間的因子的乘積；

其中如下確定步驟ii)和iii)的因子：當10mM和40mM之間的起始濃度時，因子分別為1.35和1.70，當40mM和70mM之間的起始濃度時，因子分別為1.30和1.60，以及當超過70mM的起始濃度時，因子分別為1.25和1.50；

b3)確定多肽從離子交換柱洗脫時處于步驟b2)的三步驟洗脫法中的哪個亞步驟，從而確定單步驟純化法中用于從離子交換層析材料洗脫多肽的鹽濃度。

9.根據權利要求8的方法，其特征在于離子交換層析材料是弱離子交換層析材料。

10.根據權利要求8或9的方法，其特征在于多肽是免疫球蛋白。