[發明專利]免疫球蛋白級分及其方法

無效

• 申請號: 200680016015.0
• 申請日: 2006-05-10
• 公開（公告）號: CN101171261A
• 公開（公告）日: 2008-04-30
• 發明（設計）人: 安德魯·布朗;彼得·霍布曼;理查德·佩因;米歇爾·羅尼
• 申請（專利權）人: 墨累古爾本合作有限公司
• 主分類號: C07K1/22
• 分類號: C07K1/22;A61P37/04;A61K39/395;C07K16/04
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司
• 代理人: 劉曉東;顧晉偉

技術領域

本發明涉及用作食品添加劑的含有IgA的組合物的制備。更具體地，本發明涉及制備富集IgA的乳制品提取物組合物的方法以及這樣的組合物。

背景技術

根據以前在本領域作的工作理解本發明。然而，以下的討論并非承認或認可任何引用的材料在本申請的優先權日之前在澳大利亞被公開、使用或是作為公知常識的一部分。

免疫球蛋白A(IgA)是在人的分泌物(包括乳汁)中主要的免疫球蛋白，其為機體提供抵抗病原體的保護，其結合到引起疾病的病毒、細菌、真菌及它們的毒素。IgA為嬰兒提供抵抗上述病原體的必需保護。當口服時IgA抗體是有效的，這是因為其抵抗腸內酶的降解，因此使得其理想地作為營養品(nutraceuticals)或食品補充劑。IgA可與益生菌聯用以抑制或降低由病原體引起的副作用。應用包括將IgA作為營養品成分以靶向病原體，所述病原體引起人粘膜表面例如鼻、眼、耳、肺、乳房部和陰道的感染。此外，含有IgA的產品適于腸和口部健康應用。由于通常存在于牛奶中的IgA水平低，以商業規模提高IgA產量的現有方法是通過免疫方案以提高牛奶中的水平。典型地，牛奶包含比率為約1∶8的IgA和IgG。

目前在全世界以實際上相同的方式使用實質上相同的方法生產用于食品消費的含有IgA的組合物。最常見的生產方法被稱為超免疫法，借助此法給大量的牛施用致免疫物質(例如病毒)以產生超免疫應答。作為超免疫應答的結果，由賦予免疫性的牛產生的牛奶含有增加量的IgA，也稱為“超免疫奶”。然后使用標準的膜技術濃縮所述超免疫奶以產生含有約5％w/w?IgA的乳產品提取物，所述提取物可用作食品補充劑，例如嬰兒配方奶。

該生產超免疫奶的方法的固有問題在于，免疫法方案通常需最多達三個月在牛內產生超免疫應答，并且還需一個月收獲足夠數量的超免疫奶以生產商業數量的含有IgA的乳產品提取物。另外，與本發明的方法相比，此方法還是昂貴的。

由于可變的糖基化，IgA具有在約4.5-6.5范圍內的酸性等電點或pl，通常認為其不能以具有商業價值的量吸附到陽離子交換樹脂上。本發明的方法令人驚奇地使得可以通過調節裝載和洗脫條件，通過陽離子交換色譜從乳產品(例如脫脂乳)中分級IgA。這樣的方法以前還未以商業規模實現。

此外，本發明的方法還可包括在純化乳產品的其它組分(例如乳鐵傳遞蛋白、乳過氧化物酶或生長因子)的現有方法中，作為其一部分。此方法的一個實例是其中乳產品與陽離子交換樹脂接觸，隨著流動相離子強度的增加，通過依次洗脫，首先洗脫富集IgA的級分，隨后是貧IgA的乳過氧化物酶級分，然后是乳鐵傳遞蛋白級分。

發明概述

本發明涉及制備富集IgA的乳產品提取物組合物的方法，其不需要超免疫牛并因此避免了與此相關的時間和成本。

因此，本發明的目的在于提供富集IgA的乳產品提取物組合物以及其方法，所述方法可以以商業規模使用，其克服了現有技術中的至少一些缺點。術語“富集IgA的”意為在洗脫的乳產品提取物中IgA∶IgG的比率與在分級之前的乳產品中的IgA∶IgG的比率相比增加。

根據本發明的一個方面，提供了制備富集IgA的乳產品提取物組合物的方法，所述組合物包含從乳產品中提取的IgA和IgG，其中IgA與IgG的相對含量與乳產品中IgA與IgG的相對含量相比升高，所述方法包括：

提供：

乳產品源；

陽離子交換樹脂；和

流動相；

使乳產品與陽離子交換樹脂接觸，使得IgA與IgG相比優先吸附在陽離子交換樹脂上；

用流動相洗脫所述陽離子交換樹脂；以及

收集洗脫的富集IgA的級分。

對本領域的技術人員而言，顯而易見的是：在富集IgA的乳產品提取物組合物的制備中，所述乳產品不必局限于全牛奶，而是其它乳產品也可用作原料。

在本發明的另一方面中，提供一種方法，其中所述乳產品選自全乳、脫脂乳、乳清和初乳。

生產富集IgA的乳產品提取物組合物的特定條件可以變化，并仍產生富集IgA的級分。

因此，在本發明一個優選的方面中，提供一種方法，其中采用含有0.05-0.4M?NaCl(0.29-2.34％w/v)或等同離子強度、優選0.08-0.35MNaCl(0.47-2.05％w/v))、更優選約0.17M?NaCl(1％w/v)或等同離子強度的流動相進行洗脫。在替代方案中，可以使用其它合適的等同離子強度的流動相溶液。

在本發明的另一方面中，流動相的pH為4.5-9，優選5.5-7.5，最優選pH約6.5。