[發明專利]新型療法和篩選治療化合物的方法

無效

• 申請號: 200680015384.8
• 申請日: 2006-05-03
• 公開（公告）號: CN101194163A
• 公開（公告）日: 2008-06-04
• 發明（設計）人: C·斯文伯格;L·古斯特夫森
• 申請（專利權）人: 尼亞哈姆雷特藥品公司
• 主分類號: G01N33/50
• 分類號: G01N33/50
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司
• 代理人: 程淼;梁謀

1.一種篩選用于殺死細胞的測試物質的方法，所述方法包括使測試物質與蛋白酶體接觸，并檢測它們之間導致所述蛋白酶體結構變化的相互作用。

2.根據權利要求1的方法，其通過使所述測試物質與完整的蛋白酶體體外接觸，并檢測與所述蛋白酶體的相互作用而實現。

3.根據權利要求2的方法，其中所述蛋白酶體是人紅細胞20S蛋白酶體。

4.根據權利要求2或權利要求3的方法，其中所述蛋白酶體已經過預溫育步驟，所述步驟中存在選擇性的但是可逆的蛋白酶體抑制劑。

5.根據前面所述權利要求中任何一項的方法，其中所述測試物質與所述蛋白酶體之間的相互作用是通過檢測所述蛋白酶體結構的片段化而進行檢測的。

6.根據前面所述權利要求中任何一項的方法，其中所述蛋白酶體結構的變化是使用凝膠分離法進行檢測的。

7.根據前面所述權利要求中任何一項的方法，其中選擇了使所述蛋白酶體的α6亞基產生變化的物質。

8.根據權利要求1所述的方法，其中將所述測試物質與細胞體外溫育，并監測所述細胞中該測試物質的位置。

9.根據權利要求8所述的方法，其中所述細胞是使用共聚焦顯微術進行監測的。

10.根據權利要求8或權利要求9所述的方法，其中所述測試物質用熒光標記物進行標記。

11.根據權利要求8至10中任何一項所述的方法，其中將用于所述蛋白酶體的標記的結合劑與所述物質共同施用，并觀察在所述細胞中的相對位置。

12.根據權利要求11所述的方法，其中所述結合劑是標記抗體，其對所述蛋白酶體的催化核心是特異性的。

13.一種篩選用于殺死細胞的測試物質的方法，所述方法包括下列步驟：

(a)使測試物質與蛋白酶接觸以檢測至少部分的蛋白酶抗性；

(b)使測試物質與蛋白酶體體外接觸并檢測它們之間的相互作用；或者與細胞體外接觸，并確定所述測試物質是否與所述細胞中的蛋白酶體共定位；并且

(c)選擇在步驟(a)中被發現為蛋白酶抗性并與蛋白酶體相互作用，或者根據步驟(b)與細胞中的蛋白酶體共定位的物質。

14.根據權利要求13所述的方法，其中步驟(a)是通過將所述測試物質與至少一種蛋白酶進行溫育而進行的，所述蛋白酶是哺乳動物蛋白水解酶。

15.根據權利要求14所述的方法，其中所述蛋白水解酶是胰凝乳蛋白酶或者胰蛋白酶。

16.根據權利要求13至15中任何一項的方法，其中在步驟(a)中蛋白酶抗性是通過檢測由于降解所產生的蛋白質片段來檢測的。

17.一種試劑，其與細胞的蛋白酶體相互作用造成其結構變化而用于殺死細胞，前提是所述試劑是HAMLET或者其已知的生物學活性修飾、或者它們兩者之一的生物學活性片段以外的試劑。

18.根據權利要求17所述的試劑，其中所述蛋白酶體中的結構變化是所述蛋白酶體的片段化。

19.根據權利要求17或權利要求18所述的試劑，其中所述試劑使細胞的蛋白酶體活化，但其對于所述蛋白酶體的降解作用是具有抗性的。

20.根據權利要求17至權利要求19中任何一項所述的試劑，其為蛋白質或包含蛋白質(α-乳清蛋白或者其變體除外)的蛋白復合物，所述蛋白質至少是部分未折疊或錯折疊。

21.根據權利要求17至權利要求20中任何一項所述的試劑，其包括靶向試劑，該試劑對于腫瘤細胞或者未分化細胞是特異性的。

22.根據權利要求17至權利要求21中任何一項所述的試劑，其進一步包括易位因子。

23.根據權利要求17至權利要求22中任何一項所述的試劑，其是蛋白質或肽。

24.根據權利要求17至權利要求23中任何一項所述的試劑，用于癌癥的治療。

25.一種核酸，其編碼根據權利要求23所述的試劑。