[發明專利]對乙酰氨基酚、雷尼替丁、士的寧和地那銨的人T2R受體和鑒定人苦味調節劑的相關測定方法

無效

• 申請號: 200680009985.8
• 申請日: 2006-01-06
• 公開（公告）號: CN101467040A
• 公開（公告）日: 2009-06-24
• 發明（設計）人: 李曉東;H·許;H·唐;Q·李
• 申請（專利權）人: 塞諾米克斯公司
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53;G01N33/566;C07K14/705
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所
• 代理人: 李 瑛

相關申請

本申請要求2005年2月8日提交的美國臨時申請順序號US 60/650,555的優先權。本申請還涉及2002年7月10日提交的美國順 序號US?10/191,058和2001年4月5日提交的美國順序號US 09/825,882。將所有這些臨時和非臨時申請完整地引入本文作為參考。 這些申請涉及對人苦味味覺感受器(hT2R)的鑒定和對活化這些特異性 hT2R的配體的鑒定。

發明領域

本發明涉及對活化許多以前報導的涉及苦味感覺的T2R家族中的 人G-蛋白偶聯受體(GPCR)的闡明。具體地，本發明涉及如下發現： hT2R8、hT2R54和hT2R75對苦味配體雷尼替丁作出特異性反應；hT2R54 對可在某些使用者中引起苦味余味的非類固醇抗炎藥對乙酰氨基酚作 出特異性反應；hT2R8、hT2R10、hT2R13、hT2R54、hT2R61和hT2R75 對苦味配體苯甲酸地那銨作出特異性反應；和hT2R8、hT2R9、hT2R10、 hT2R54和hT2R75對苦味毒素士的寧作出特異性反應。

基于這些發現，這些人味覺感受器、其片段或變體或嵌合體，包 括直向同源物、剪接變體、單核苷酸多態性(SNPS)及其遺傳工程突變 體可用于測定法，優選基于高流通量細胞的測定法，這些測定法用于 鑒定調節(優選阻斷)士的寧、對乙酰氨基酚、雷尼替丁和地那銨以及 結構相關化合物和活化這些感受器的其它化合物的苦味的化合物。使 用這些測定方法鑒定的化合物可以用作食品、飲料或藥物產品的添加 劑以便改善其味道。

相關領域的描述

人可以識別的基本味道之一是苦味。到目前為止，對苦味的生理 學了解得非常不夠。目前的研究已經開始闡明味覺生物學(Lindemann， Nature(2001))。目前認為許多苦味化合物通過與細胞表面受體發生 相互作用產生苦味。這些受體屬于與胞內G蛋白發生相互作用的七個 跨膜區受體的家族。

在本發明之前約5年，在人或嚙齒動物中鑒定了新的GPCR家族， 稱作T2R(Adler等，Cell?100(6)：693-702(2000)；Chandrashekar 等，Cell?100(6)：703-711(2000)；Matsunami?H，Montmayeur?J?P， Buck?L?B.Nature?404(6778)：601-4(2000))。在發現T2R基因家 族后不久產生了大量證據提示T2R包含一類至少在嚙齒動物和人體內 表達的味覺感受器，它們介導對苦味化合物的反應。例如，發現T2R 基因在舌和腭上皮細胞的味覺感受器細胞亞類中特異性表達。其次， 發現人T2R之一(hT2R1)的基因位于與對苦味化合物6-正-丙基-2-硫 尿嘧啶在人體內的敏感性相關的染色體座位上(Adler等，(同上) (2000))。第三，發現小鼠T2R之一(mT2R5)位于與苦味化合物環己酰 亞胺在小鼠中的敏感性相關的染色體座位上。另外在報導發現了T2R 基因家族及其在苦味轉導中的預期作用后不久證實，小鼠T2R，特別 是mT2R5可以活化味轉導素，即在味細胞中特異性表達并且與苦味刺 激轉導相關的G蛋白(Wong等，Nature381：796-800(1996))。mT2R5 對味轉導素的活化僅在對環己酰亞胺作出反應時發生(Chandrashekar 等，(同上)(2000)。因此，提出了mT2R家族介導小鼠中的苦味反應， 而hT2R家族介導人中的苦味反應。在這一相同的Chandrasekhar參考 文獻中，證實了一種人T2R，即hT2R4由地那銨特異性活化 (Chandrashekar等，(同上)2000)。然而，本研究中使用的有效地那 銨濃度(1.5mM)非常高，即高于報導的地那銨對人的苦味閾值10. sup.5-倍(Saroli，Naturwissenschaften?71：428-429(1984))。因 此，Chandrashekhar沒有令人信服地使特異性苦味配體與任何hT2R 相對應。