[發明專利]通過引起RNA干擾的化合物治療腸病癥

無效

• 申請號: 200680008170.8
• 申請日: 2006-03-14
• 公開（公告）號: CN101184480A
• 公開（公告）日: 2008-05-21
• 發明（設計）人: 伊雷妮·加斯孔;安娜·I·希門尼斯;瑪麗亞·康塞普西翁·希門尼斯;吉塞·P·羅曼;安吉拉·塞斯托
• 申請（專利權）人: 西倫蒂斯私人股份公司
• 主分類號: A61K31/00
• 分類號: A61K31/00;A61K31/7115;A61P1/00
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責任公司
• 代理人: 吳小明

發明領域

本發明涉及通過RNAi直腸內給藥技術對腸疾病進行治療的方法和組合物。本發明的組合物包括短干擾核酸分子(siNA)和相關的化合物，包括但不限于，小干擾RNAs(siRNA)。具體地說，本發明的組合物能夠被用于腸疾病的治療，其中包括：過度增殖性疾病，特別是結腸直腸癌；自身免疫和炎性腸病(IBD)，特別是局限性回腸炎；結腸炎，特別是潰瘍性結腸炎；腸易激綜合征；感染性腸疾病，例如假膜性結腸炎，阿米巴病或腸結核；結腸息肉；憩室??；便秘；腸梗阻；吸收不良綜合征；直腸疾病和腹瀉。

在某些實施方案中，由一種與1型輔助T(Th1)細胞免疫反應相關的細胞因子——白細胞介素-12(IL-12)水平的增高所引起的腸病癥，例如自身免疫疾病和IBD，是用此方法來進行治療的。本發明提供了治療與IL-12過量表達有關的疾病的組合物和方法，特別是局限性回腸炎，其中包括siRNA和靶向IL12-p40亞基和/或IL12-p35亞基的相關化合物。

發明背景

以RNAi作為工具來調節基因的表達

RNA干擾是指由雙鏈RNA(dsRNA)介導的序列特異性轉錄后基因沉默的過程。在20世紀90年代初期發現了植物具有此現象后，Andy?Fire和Craig?Mello證明了在Caenorhabditis線蟲中dsRNA能夠以一種非常高效的方式特異性地、有選擇性地抑制基因的表達(Fire?et?al.，1998)。第一條鏈(有義RNA)的序列與目標信使RNA(mRNA)的對應區域的序列相一致。第二條鏈(反義RNA)與mRNA互補。這樣形成的dsRNA證明比相應的單鏈RNA分子(具體地說，反義RNA)的效率高幾個數量級。

RNAi過程起始于DICER酶與dsRNA相遇并將其切成稱為小干擾RNAs或siRNA的片段。此蛋白質屬于核糖核酸酶III核酸酶家族。蛋白質復合體將這些siRNAs聚集起來，并利用它們的編碼作為指導去搜尋和破壞細胞中具有匹配序列的RNA，例如目標mRNA(見Bosher&Labouesse，2000；和Akashi?et?al.，2001)。

在應用RNAi進行基因擊倒的嘗試中，經過驗證，哺乳動物細胞已經發展了多種抗病毒感染的保護機制，其可阻礙這種方法的使用。的確，極低的病毒dsRNA水平的存在觸發一種干擾素的反應，導致全面非特異性的翻譯抑制，進而觸發調亡(Williams，1997，Gil&Esteban，2000)。

2000年，dsRNA被報道特異性地抑制小鼠卵母細胞和早期胚胎中的3個基因。翻譯停滯，和從而引起的PKR反應，當胚胎繼續發育時沒有被觀察到(Wianny&Zernicka-Goetz，2000)。Ribopharma?AG(Kulmbach，Germany)的研究證明了哺乳動物細胞中RNAi的功能性，其功能在于利用短(20-24堿基對)dsRNAs切斷人類細胞基因，而又不啟動急性期反應。其他的研究小組也進行了類似的試驗，并驗證了這些結果(Elbashir?et?al.，2001；Caplen?et?al.，2001)。經過在人類和小鼠的多種正常和癌癥細胞品系中的測試證明短發夾結構RNAs(shRNAs)能夠和它們的siRNA負體同等高效率地使基因沉默(Paddison?et?al.，2002)。最近，另外一組小RNAs(21-25堿基對)被顯示能夠引起對基因表達的負調節作用。這些RNAs，即小時序控制的RNAs(stRNAs)，對Caenorhabditis線蟲發育過程中基因表達的時間選擇具有調節作用(關于綜述參見Banerjee&Slack，2002；和Grosshans&Slack，2002)。

科學家們已經在一些系統中使用了RNAi，其中包括Caenorhabditis線蟲，果蠅，錐體蟲，和其它的無脊椎動物。幾個研究小組近期提出了RNAi在不同的哺乳動物細胞系(特別是HeLa細胞)中對蛋白質生物合成的特異性抑制，從而證明了RNAi是一種可廣泛應用的在體外使基因沉默的方法。在這些結果的基礎上，RNAi已經快速地成為了一種著名的確認(識別和分配)基因功能的工具。使用短dsRNA寡核苷酸的RNAi有助于對僅被部分測序的基因功能的理解。

最近，Krutzfeldt和他的同事們的研究顯示一類被稱為antagomirs的特別設計合成的化合物能夠有效地使微小RNAs(miRNAs)沉默，其中微小RNAs為控制基因表達的非編碼RNA片段(Krutzfeldt?et?al.，2005)。