[發(fā)明專利]用于進行涉及核酸分子的直接酶反應(yīng)的方法無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 200680006345.1 | 申請日： | 2006-02-08 |
| 公開（公告）號： | CN101128604A | 公開（公告）日： | 2008-02-20 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 梁寧根;金鐘烈;金圣旭;李承寬 | 申請（專利權(quán)）人： | 生物探索公司 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京金信立方知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 | 代理人： | 朱梅;徐志明 |
| 地址： | 韓國*** | 國省代碼： | 韓國;KR |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 用于 進行 涉及 核酸 分子 直接 反應(yīng) 方法 | ||
1.一種用于進行涉及核酸分子的直接酶反應(yīng)的方法，其包括如下步驟：
(a)直接使用生物樣品在包含兩性離子緩沖液和/或非還原性碳水化合物的反應(yīng)混合物中進行酶反應(yīng)，該兩性離子緩沖液和/或非還原性碳水化合物用于防止生物樣品抑制酶反應(yīng)，其中在酶反應(yīng)之前不純化生物樣品中存在的核酸分子；以及
(b)從酶反應(yīng)中得到產(chǎn)物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述涉及核酸分子的酶反應(yīng)為擴增反應(yīng)、逆轉(zhuǎn)錄、DNA連接、核酸酶介導的反應(yīng)或DNA甲基化。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述生物樣品為病毒、細菌、組織、細胞、血液、淋巴液、骨髓液、唾液、奶、尿、糞便、眼內(nèi)液、精液、腦提取物、脊髓液、關(guān)節(jié)液、胸液、腹水、羊水或細胞組織液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述兩性離子緩沖液選自包括HEPES(4-(2-羥乙基)-1-哌嗪乙烷磺酸)、Tricine(N-三(羥甲基)甲基甘氨酸)、Bicine(N，N-雙(2-羥乙基)甘氨酸)、Taps(N-三(羥甲基)甲基-3-氨基丙烷磺酸)、ACE(N-(2-(乙酰胺)-2-氨基乙烷-磺酸)、ADA(N-(2-乙酰胺)-亞氨基二乙酸)、MES(2-(N-嗎啉代)-乙烷磺酸)、MOPS(3-(N-嗎啉代)丙烷磺酸)和MOPSO(3-N-嗎啉代)-2-羥基丙烷磺酸)的組。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中，所述兩性離子緩沖液為HEPES、Tricine或Bicine。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中，所述兩性離子緩沖液為Tricine。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述非還原性碳水化合物為乙二醇、聚乙二醇、聚甘油、非還原性二糖、三糖、四糖、糖醇、醛糖酸或其內(nèi)酯、糖二酸或其內(nèi)酯或者糖醛酸。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中，所述非還原性碳水化合物為非還原性二糖、三糖、四糖或衍生自單糖的糖醇。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中，所述非還原性碳水化合物為山梨糖醇、甘露醇、海藻糖、蜜三糖或蔗糖。
10.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中，所述酶反應(yīng)為擴增反應(yīng)。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中，所述擴增反應(yīng)為熱啟動PCR(聚合酶鏈式反應(yīng))。
12.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中，所述擴增反應(yīng)為RT-PCR(逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(yīng))。
13.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中，所述酶反應(yīng)為核酸酶介導的反應(yīng)。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其中，所述核酸酶介導的反應(yīng)為侵染檢測。
15.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述反應(yīng)混合物進一步包含兩性離子表面活性劑、牛血清白蛋白、多胺或其組合。
16.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中，所述生物樣品為血液。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其中，所述生物樣品為血液，且存在于血液中的核酸分子具有低拷貝數(shù)。
18.一種用于進行涉及核酸分子的直接酶反應(yīng)并直接使用生物樣品的試劑盒，其包括用于酶反應(yīng)的反應(yīng)混合物，該反應(yīng)混合物包含用以防止生物樣品抑制酶反應(yīng)的兩性離子緩沖液和/或非還原性碳水化合物，而存在于生物樣品中的核酸分子在酶反應(yīng)之前不需要純化。
19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的試劑盒，其中，所述涉及核酸分子的酶反應(yīng)為擴增反應(yīng)、逆轉(zhuǎn)錄、DNA連接、核酸酶介導的反應(yīng)或DNA甲基化。
20.根據(jù)權(quán)利要求18所述的試劑盒，其中，所述生物樣品為病毒、細菌、組織、細胞、血液、淋巴液、骨髓液、唾液、奶、尿、糞便、眼內(nèi)液、精液、腦提取物、脊髓液、關(guān)節(jié)液、胸液、腹水、羊水或細胞組織液。
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