[發(fā)明專利]輔助探針及其利用方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200680006207.3
• 申請(qǐng)日: 2006-02-27
• 公開（公告）號(hào): CN101128582A
• 公開（公告）日: 2008-02-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 藤川利彥;薄井貢
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 衛(wèi)材R&D管理有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/09
• 分類號(hào): C12N15/09;C12Q1/68;G01N33/566
• 代理公司: 中科專利商標(biāo)代理有限責(zé)任公司
• 代理人: 李貴亮

1.一種目標(biāo)基因的檢測(cè)方法，其是使用包含如下所述的兩個(gè)探針的一對(duì)第一及第二探針、以及具有多個(gè)與所述第一探針相同的核酸區(qū)域和可以與目標(biāo)基因雜交的目標(biāo)區(qū)域的輔助探針，形成信號(hào)探針聚合物，來檢測(cè)目標(biāo)基因的方法，其中的兩個(gè)探針為：

從5’端部開始依次設(shè)置有核酸區(qū)域X、核酸區(qū)域Y及核酸區(qū)域Z，具有下述化學(xué)式(1)的結(jié)構(gòu)，包含3處核酸區(qū)域的第一探針；

[化1]

從5’端部開始依次設(shè)置核酸區(qū)域X’、核酸區(qū)域Y’及核酸區(qū)域Z’，具有下述化學(xué)式(2)的結(jié)構(gòu)，包含3處核酸區(qū)域的第二探針；

[化2]

在所述化學(xué)式(1)及(2)中，核酸區(qū)域X與核酸區(qū)域X’、核酸區(qū)域Y與核酸區(qū)域Y’、核酸區(qū)域Z與核酸區(qū)域Z’分別為可以雜交的互補(bǔ)區(qū)域；

在所述的檢測(cè)方法中，所述輔助探針具有從5’端部開始依次設(shè)置有所述核酸區(qū)域X、所述核酸區(qū)域Y、所述核酸區(qū)域X及所述目標(biāo)區(qū)域的結(jié)構(gòu)，或從5’端部開始依次設(shè)置有所述目標(biāo)區(qū)域、所述核酸區(qū)域Z、所述核酸區(qū)域Y及所述核酸區(qū)域Z的結(jié)構(gòu)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的目標(biāo)基因的檢測(cè)方法，其特征在于，

所述輔助探針在所述目標(biāo)區(qū)域與所述核酸區(qū)域X或所述核酸區(qū)域Z之間，還具有不與目標(biāo)基因以及所述第一及第二探針雜交的間隔區(qū)域。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的目標(biāo)基因的檢測(cè)方法，其特征在于，

所述輔助探針，從5’端部開始依次含有包含所述核酸區(qū)域X、所述核酸區(qū)域Y及所述核酸區(qū)域X的XYX區(qū)域，包含所述核酸區(qū)域Y及所述核酸區(qū)域X的YX區(qū)域，所述目標(biāo)區(qū)域；或者從5’端部開始依次含有所述目標(biāo)區(qū)域，包含所述核酸區(qū)域Z及所述核酸區(qū)域Y的ZY區(qū)域，包含所述核酸區(qū)域Z、所述核酸區(qū)域Y及所述核酸區(qū)域Z的ZYZ區(qū)域。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的目標(biāo)基因的檢測(cè)方法，其特征在于，

在所述XYX區(qū)域與所述YX區(qū)域之間、或所述ZY區(qū)域與所述ZYZ區(qū)域之間，還含有不與目標(biāo)基因以及所述第一及第二探針雜交的間隔區(qū)域。

5.根據(jù)權(quán)利要求1～4中任意一項(xiàng)所述的目標(biāo)基因的檢測(cè)方法，其特征在于，

包含使所述輔助探針以所述目標(biāo)基因?yàn)槟０暹M(jìn)行連接的反應(yīng)工序。

6.根據(jù)權(quán)利要求1～4中任意一項(xiàng)所述的目標(biāo)基因的檢測(cè)方法，其特征在于，

所述輔助探針在3’末端的目標(biāo)區(qū)域具有多聚dT或引物序列，包含將所述輔助探針作為引物、以目標(biāo)RNA為模板進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄的反應(yīng)工序。

7.根據(jù)權(quán)利要求1～6中任意一項(xiàng)所述的目標(biāo)基因的檢測(cè)方法，其特征在于，

通過使用只有所述目標(biāo)區(qū)域不同的多個(gè)輔助探針，同時(shí)檢測(cè)多個(gè)目標(biāo)基因。

8.一種信號(hào)探針聚合物的形成方法，其是使用包含如下所述的兩個(gè)探針的一對(duì)第一及第二探針、以及具有多個(gè)與所述第一探針相同的核酸區(qū)域和可以與目標(biāo)基因雜交的目標(biāo)區(qū)域的輔助探針，使所述一對(duì)第一及第二探針的多對(duì)、所述輔助探針和所述目標(biāo)基因發(fā)生反應(yīng)，形成信號(hào)探針聚合物的方法，其中的兩個(gè)探針為：

從5’端部開始依次設(shè)置有核酸區(qū)域X、核酸區(qū)域Y及核酸區(qū)域Z，具有下述化學(xué)式(1)的結(jié)構(gòu)，包含3處核酸區(qū)域的第一探針；

[化3]

從5’端部開始依次設(shè)置有核酸區(qū)域X’、核酸區(qū)域Y’及核酸區(qū)域Z’，具有下述化學(xué)式(2)的結(jié)構(gòu)，包含3處核酸區(qū)域的第二探針；

[化4]

在所述化學(xué)式(1)及(2)中，核酸區(qū)域X與核酸區(qū)域X’、核酸區(qū)域Y與核酸區(qū)域Y’、核酸區(qū)域Z與核酸區(qū)域Z’分別為可以雜交的互補(bǔ)區(qū)域；

在所述的檢測(cè)方法中，所述輔助探針具有從5’端部開始依次設(shè)置有所述核酸區(qū)域X、所述核酸區(qū)域Y、所述核酸區(qū)域X及所述目標(biāo)區(qū)域的結(jié)構(gòu)，或從5’端部開始依次設(shè)置有所述目標(biāo)區(qū)域、所述核酸區(qū)域Z、所述核酸區(qū)域Y及所述核酸區(qū)域Z的結(jié)構(gòu)。

9.一種輔助探針，其特征在于，

在權(quán)利要求1～8中任意一項(xiàng)所述的方法中使用，具有從5’端部開始依次設(shè)置具有所述核酸區(qū)域X、所述核酸區(qū)域Y及所述核酸區(qū)域X的XYX區(qū)域和所述目標(biāo)區(qū)域的結(jié)構(gòu)。