[發(fā)明專利]重組共表達(dá)維生素K環(huán)氧化物還原酶亞基1以提高依賴維生素K的蛋白質(zhì)表達(dá)

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200680004712.4
• 申請(qǐng)日: 2006-01-27
• 公開（公告）號(hào): CN101124320A
• 公開（公告）日: 2008-02-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 弗里德里希·沙伊夫林格爾;恩斯特·伯姆
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 巴克斯特國(guó)際公司;巴克斯特保健股份有限公司
• 主分類號(hào): C12N9/04
• 分類號(hào): C12N9/04
• 代理公司: 上海市華誠(chéng)律師事務(wù)所
• 代理人: 傅強(qiáng)國(guó);涂勇

技術(shù)領(lǐng)域

[001]本發(fā)明涉及一種宿主生物體，其含有編碼維生素K還原酶復(fù)合體亞基1(VKORC1)的重組核酸和編碼依賴于維生素K的(VKD)蛋白質(zhì)的重組核酸，其中重組VKORC1和重組VKD蛋白質(zhì)在所述宿主生物體中都得到表達(dá)。本發(fā)明還涉及一種包含細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)，該細(xì)胞含有所述重組核酸。本發(fā)明還涉及一種提高在宿主生物體中表達(dá)重組VKD蛋白質(zhì)的生產(chǎn)率的方法，該宿主生物體在合適的體系中進(jìn)行培養(yǎng)。

背景技術(shù)

[002]維生素K環(huán)氧化物還原酶復(fù)合體(VKORC)重復(fù)利用還原形式的維生素K，該維生素K形式是依賴于維生素K的(VKD)蛋白質(zhì)翻譯后γ-羧基化必需的輔助因子(Nelsestuen，G.L.，Zytkovicz，T.H.，&?Howard，J.B.(1974)The?mode?of?action?of?vitamin?K?Identification?ofgamma-carboxyglutamic?acid?as?a?component?of?prothrombin.J.Biol.Chem.，249，6347-6350)。最近，VKORC1基因得到了鑒定，并且被Rost等于2004年進(jìn)行了詳細(xì)描述(Rost，S.，F(xiàn)regin，A.，Ivaskevicius，V.，Conzelmann，E.，Hortnagel，K.，PeIz，H.J.，Lappegard，K.，Seifried，E.，Scharrer，I.，Tuddenham，E.G.，Muller，C.R.，Strom，T.M.，&?Oldenburg，J.(2004)Mutations?inVKORC1?cause?warfarin?resistance?and?multiple?coagulation?factor?deficiency?type?2.Nature，427，537-541)。

[003]VKD蛋白質(zhì)含有γ-羧基化谷氨酸(gla)殘基，該殘基表現(xiàn)出特異的生物化學(xué)和生理學(xué)特性，類似于依賴于Ca的結(jié)合凝血因子帶負(fù)電磷脂膜的特性(Mann，K.G.，Jenny，R.J.，&Krishnaswamy，S.(1988)Cofactor?proteins?in?the?assembly?and?expression?of?blood?clottingenzyme?complexes.Annu.Rev.Biochem.，57，915-956)。VKD蛋白質(zhì)包括促凝血的因子II、VII和X，以及抗凝血的蛋白質(zhì)C、S和Z。雖然限定為一種單獨(dú)的已知酶促反應(yīng)，但在所有哺乳動(dòng)物組織中都發(fā)現(xiàn)有γ-羧化酶活性(Vermeer，C.&?de?Boer-van?den?Berg?MA(1985)Vitamin?K-dependent?carboxylase.Haematologia(Budap)，18，71-97)。γ-羧化酶使用還原的維生素K作為輔助因子來(lái)催化羧基化反應(yīng)。