[發明專利]重組共表達維生素K環氧化物還原酶亞基1以提高依賴維生素K的蛋白質表達

無效

• 申請號: 200680004712.4
• 申請日: 2006-01-27
• 公開（公告）號: CN101124320A
• 公開（公告）日: 2008-02-13
• 發明（設計）人: 弗里德里希·沙伊夫林格爾;恩斯特·伯姆
• 申請（專利權）人: 巴克斯特國際公司;巴克斯特保健股份有限公司
• 主分類號: C12N9/04
• 分類號: C12N9/04
• 代理公司: 上海市華誠律師事務所
• 代理人: 傅強國;涂勇

1.一種宿主生物體，其含有編碼維生素K還原酶復合體亞基1(VKORC1)或其功能活性衍生物的重組核酸、以及編碼依賴于維生素K的(VKD)蛋白質或其功能活性衍生物的重組核酸，其中重組VKORC1和重組VKD蛋白質在所述宿主生物體中都得到表達。

2.如權利要求1所述的宿主生物體，其特征在于，所述編碼重組VKORC1的核酸或所述編碼重組VKD蛋白質的核酸分別地、或者兩者同時地通過選自由誘導表達、瞬時表達和固定表達所組成的模式組的表達模式進行表達。

3.如權利要求1或2所述的宿主生物體，其特征在于，所述宿主生物體是哺乳動物細胞。

4.如權利要求3所述的宿主生物體，其特征在于，所述哺乳動物細胞是從選自CHO細胞和HEK293細胞的哺乳動物細胞株衍生的細胞。

5.如權利要求1至4中任一項所述的宿主生物體，其特征在于，所述重組VKD蛋白質是促凝血因子或其功能活性衍生物。

6.如權利要求5所述的宿主生物體，其特征在于，所述促凝血因子選自由因子II、因子VII、因子IX和因子X所構成的因子組。

7.如權利要求6所述的宿主生物體，其特征在于，所述促凝血因子是人類因子IX。

8.一種包含細胞的細胞培養系統，所述細胞含有編碼維生素K還原酶復合體亞基1(VKORC1)或其功能活性衍生物的重組核酸、以及編碼依賴于維生素K的(VKD)蛋白質或其功能活性衍生物的重組核酸，其中重組VKORC1和重組VKD蛋白質在所述細胞中都得到表達。

9.如權利要求8所述的細胞培養系統，其特征在于，所培養的細胞是哺乳動物細胞。

10.如權利要求9所述的細胞培養系統，其特征在于，所述哺乳動物細胞選自CHO細胞和HEK293細胞。

11.如權利要求8至10中任一項所述的細胞培養系統，其特征在于，所述重組VKD蛋白質是促凝血因子或其功能活性衍生物。

12.如權利要求11所述的細胞培養系統，其特征在于，所述促凝血因子選自由因子II、因子VII、因子IX和因子X所構成的因子組。

13.如權利要求12所述的細胞培養系統，其特征在于，所述促凝血因子是人類因子IX。

14.一種提高在宿主生物體中表達重組的依賴于維生素K的(VKD)蛋白質或其功能活性衍生物的生產率的方法，其包括下述步驟：

(a)提供宿主生物體；

(b)將編碼VKD蛋白質或其功能活性衍生物的重組核酸插入到步驟(a)的宿主生物體中；

(c)將編碼維生素K還原酶復合體亞基1(VKORC1)或其功能活性衍生物的重組核酸插入到步驟(a)的宿主生物體中；以及

(d)表達步驟(b)和(c)所述重組核酸。

15.一種提高在宿主生物體中表達重組的依賴于維生素K的(VKD)蛋白質或其功能活性衍生物的生產率的方法，其包括下述步驟：

(a)提供一種編碼VKD蛋白質或其功能活性衍生物的重組核酸被整合入其基因組的宿主生物體；

(b)將編碼維生素K還原酶復合體亞基1(VKORC1)或其功能活性衍生物的重組核酸插入到步驟(a)的宿主生物體中；以及

(c)表達步驟(a)和(b)所述核酸。

16.如權利要求15所述的方法，其特征在于，穩定地表達所述編碼VKD蛋白質或其功能活性衍生物的重組核酸。

17.一種提高在宿主生物體中表達重組的依賴于維生素K的(VKD)蛋白質或其功能活性衍生物的生產率的方法，其包括下述步驟：

(a)提供一種編碼維生素K還原酶復合體亞基1(VKORC1)或其功能活性衍生物的重組核酸被整合入其基因組的宿主生物體；

(b)將編碼VKD蛋白質或其功能活性衍生物的重組核酸插入到步驟(a)的宿主生物體中；以及

(c)表達步驟(a)和(b)所述核酸。

18.如權利要求17所述的方法，其特征在于，穩定地表達所述編碼VKORC1或其功能活性衍生物的重組核酸。

19.一種重組的依賴于維生素K的(VKD)蛋白質，其可通過如下方法獲得：將編碼維生素K還原酶復合體亞基1(VKORC1)或其功能活性衍生物的重組核酸以及編碼所述重組VKD蛋白質或其功能活性衍生物的重組核酸插入到宿主生物體中，表達所述核酸，以及回收所述重組VKD蛋白質。