[發明專利]細胞透化和穩定試劑及其使用方法

有效

• 申請號: 200680004090.5
• 申請日: 2006-01-24
• 公開（公告）號: CN101115388A
• 公開（公告）日: 2008-01-30
• 發明（設計）人: 恩里克·拉貝利諾;安德烈亞斯·范阿格托萬;法布里斯·馬萊格
• 申請（專利權）人: 貝克曼考爾特公司
• 主分類號: A01N37/18
• 分類號: A01N37/18;A61K38/00
• 代理公司: 上海市華誠律師事務所
• 代理人: 傅強國

1.一種細胞透化和穩定試劑，包括：

(a)N-酰基肌氨酸或其由下述分子結構式表示的鹽：

R₁-CO-N(CH₃)CH₂COOX₁

其中R₁是具有8～18碳原子的烷基或亞烷基團，而X₁是H、Na⁺、或K⁺；

(b)pH調節劑，用以調節所述試劑的pH至小于7；以及

(c)水介質；

所述試劑具有低離子強度，這由其電導率小于9.0mS/cm所確定。

2.如權利要求1所述的試劑，其特征在于，進一步包含由下述分子結構式表示的陰離子 表面活性劑：

R₂-O-SO₃X₂

其中R₂是具有8～18碳原子的烷基或亞烷基團；而X₂是Na⁺、K⁺、NH₄⁺或NH₂C(CH₂OH)₃。

3.如權利要求1或2所述的試劑，其特征在于，進一步包含牛血清白蛋白。

4.如權利要求1至3中任一項所述的試劑，其特征在于，進一步含有甘油。

5.如權利要求1至4中任一項所述的試劑，其特征在于，所述pH的范圍為4～6。

6.如權利要求1至5中任一項所述的試劑，其特征在于，所述電導率小于1.2mS/cm。

7.如權利要求1至6中任一項所述的試劑，其特征在于，所述N-酰基肌氨酸是N-月桂 酰肌氨酸。

8.如權利要求7所述的試劑，其特征在于，所述N-酰基肌氨酸的濃度范圍是0.1mM～10 mM。

9.如權利要求1至8中任一項所述的試劑，其特征在于，所述陰離子表面活性劑是三(羥 甲基)氨基甲烷十二烷基硫酸鹽。

10.如權利要求9所述的試劑，其特征在于，所述陰離子表面活性劑的濃度范圍是0.1 mM～10mM。

11.一種滲透過細胞膜并保留細胞的細胞組分以用于流式細胞術分析的方法，包括如下 步驟：

(a)將含有細胞的樣品與如權利要求1至10中任一項所述的細胞透化和穩定試劑相混合， 以形成樣品混合物；

(b)將所述樣品混合物孵育足夠的時間以便滲透過細胞膜，使得胞內蛋白質在所述細胞 膜內聚集，并且保留細胞組分使其與細胞標記物結合；以及

(c)將所述細胞標記物加入所述樣品混合物，并且將所述樣品混合物再次孵育一定時間， 使得所述細胞標記物與所述在步驟(b)中保留的細胞組分結合，以便接著通過流式細胞術進行 分析。

12.如權利要求11所述的方法，其特征在于，所述細胞組分是胞內抗原位點或細胞表面 抗原位點、DNA、RNA、或者細胞骨架成分。

13.如權利要求12所述的方法，其特征在于，所述胞內抗原位點是血紅蛋白抗原位點或 者血紅蛋白變體的抗原位點。

14.如權利要求12所述的方法，其特征在于，所述細胞骨架成分包括微管蛋白和膜收縮 蛋白。

15.如權利要求11所述的方法，其特征在于，所述細胞標記物是所述胞內抗原位點的特 異性抗體。

16.如權利要求11所述的方法，其特征在于，所述細胞標記物是所述DNA或RNA分子 的特異性核酸探針。

17.如權利要求11所述的方法，其特征在于，所述細胞標記物是所述細胞表面抗原位點 的特異性抗體。

18.如權利要求11所述的方法，其特征在于，進一步包括：在所述樣品混合物中的所述 細胞標記物結合于所述細胞組分后，固定所述細胞。