[發(fā)明專利]制備聚合物結合物的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200680004004.0
• 申請日: 2006-01-31
• 公開（公告）號: CN101163507A
• 公開（公告）日: 2008-04-16
• 發(fā)明（設計）人: 烏德春;趙洪;理查德·B·格林沃爾德
• 申請（專利權）人: 安龍制藥公司
• 主分類號: A61K47/48
• 分類號: A61K47/48
• 代理公司: 中原信達知識產權代理有限責任公司
• 代理人: 郇春艷;郭國清

發(fā)明領域

本發(fā)明涉及制備聚合物結合物的改進方法。特別地，本發(fā)明涉及制備并純化生物活性部分結合物例如蛋白質的聚合物的改進方法。

背景技術

這些年來，聚合物與生物活性部分例如蛋白質、多肽或小分子的結合(conjugation)作為提高效率同時通常降低該部分的一個或多個消極方面的方式日益普及。特別地，利用聚亞烷基氧化物(PAO)或更具體地，聚乙二醇(PEG)的聚合物結合已經廣泛地被接受用于設計治療用途的部分有毒或免疫原性藥物的有效衍生物。

僅舉幾個例子，美國專利No.5,643,575；5,919,455；5,605,976描述了非抗原性的聚合物、其制備和與生物活性部分結合的方法。此處引入上述每篇的內容作為參考。盡管這些專利提供了改進生物活性部分例如酶、蛋白質和其它肽以及多肽的用途的有價值的方法，但是仍需要改進結合方法。

例如，上述′575專利公開了生產支化PEG衍生物并使蛋白質與之結合的方法。其中公開的一種方法包括利用過量三功能分子例如賴氨酸乙酯，與活化mPEG衍生物例如琥珀酰亞胺基碳酸酯(SC)-mPEG結合。雖然該方法提供了所需活化支化聚合物和得到的結合物，已經發(fā)現在某些環(huán)境下更經濟地提供更高純度所需結合物是合乎需要的。過去，已經提出利用柱色譜除去任何未反應的起始材料或副產物。例如參見美國專No.5,932,462。該技術是昂貴的，不便于大批生產，并可能導致明顯收率下降。非常合乎需要的是在生產最終產物之前，消除或鈍化剩余的起始材料和副產物，其可能與形成所需支化聚合物-治療結合物競爭。這將挽回收率損失。因此，已經尋找可選擇方案，特別是商業(yè)生產的情況，其中關鍵的是使生物活性部分的損失最小化。

本發(fā)明提供了一種制備活化PEG接頭和它們隨后結合至生物活性部分的新的改進方法。此外本發(fā)明滿足了未滿足的需要，提供了一種經濟有效的結合方法，具有超過現有技術的改進純度和收率。

發(fā)明概述

本發(fā)明一個實施方式中，提供了一種制備活化聚合物和用其生產聚合物結合物的新方法。本發(fā)明的這方面中第一步包括將可活化的聚合物殘基例如mPEG-OH與能夠在可活化聚合物殘基上提供離去基團的活化劑反應，并提供第一反應混合物，該混合物包含活化的聚合物殘基，例如mPEG-琥珀酰亞胺基碳酸酯(在下文中稱為SC-PEG)和優(yōu)選痕量的可活化聚合物殘基。此處使用的活化劑實例包括二琥珀酰亞胺基碳酸酯(DSC)或光氣(或三光氣)和N-羥基琥珀酰亞胺(在下文中稱為NHS)的組合物。此外在以下詳細說明部分中討論活化劑/離去基團。

第二步驟需要將第一反應混合物與具有至少一個保護基的多功能連接部分反應，所述保護基即不與活化聚合物殘基例如賴氨酸乙酯反應的官能團。在第一反應混合物的活化聚合物殘基相對于多功能連接部分的活性基團摩爾過量的條件下進行第二步驟，從而形成第二反應混合物。第二反應混合物包含第一反應混合物和中間聚合物，例如(PEG)₂Lys乙酯，其得自活化的聚合物殘基與多功能連接部分的反應。

下一步中，用第一猝滅劑例如苯乙胺或芐胺猝滅第二反應混合物，以鈍化活化聚合物殘基，形成第三反應混合物，其包含中間聚合物結合物等。然后，將第二猝滅劑例如TBDMSiCl加入至第三反應混合物，以鈍化其中可活化的聚合物殘基，從而形成第四反應混合物，其包含中間聚合物結合物。第一和第二猝滅劑可以任何次序加入，只要不將它們同時加入。然而，優(yōu)選首先加入第一猝滅劑，其后加入第二猝滅劑。

然后用去保護劑處理第四反應混合物，以除去保護基例如強堿如LiOH，以去保護乙酯，或強酸例如TFA，以去保護叔丁基酯。然后中和中間聚合物，即PEG化的多功能連接部分，以形成第五反應混合物。

然后第五反應混合物與另一活化劑或能夠活化用于連接生物活性部分的中間聚合物的化合物例如NHS反應，以形成第六反應混合物。然后包含活化聚合物的第六反應混合物與生物活性部分反應，形成所需聚合物結合物。

用于本發(fā)明目的，關于生物活性部分公開了該方法。然而應該理解該術語也包括靶向劑和診斷劑。不同于現有技術方法，該第六反應混合物包含所需活化聚合物，沒有與生物活性部分反應的競爭中間物。

本發(fā)明另一個方面中，例如通過透濾、尺寸排阻、離子交換柱、親和層析柱或其它普通技術人員已知的技術，從最終反應混合物分離所需聚合物結合物。應當理解分離技術的選擇取決于形成的單個最終結合物，可以不需過多實驗作出該選擇。