[發明專利]使用正義單鏈病毒RNA載體在植物中生產抗體

有效

• 申請號: 200680003264.6
• 申請日: 2006-01-27
• 公開（公告）號: CN101115842A
• 公開（公告）日: 2008-01-30
• 發明（設計）人: A·吉里奇;S·馬里約內;V·克利姆克;Y·格萊巴
• 申請（專利權）人: 愛康遺傳有限公司
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;C12N15/67;C12N15/63
• 代理公司: 北京市中咨律師事務所
• 代理人: 黃革生;隗永良

1.在植物、植物組織或植物細胞中產生包含至少第一和第二蛋白質亞基的異源寡聚蛋白質的方法，所述方法包括在植物細胞中通過以下方式表達至少所述第一和第二蛋白質亞基：

(i)向所述植物、所述植物組織或所述植物細胞提供第一和第二正義單鏈RNA病毒載體，所述第一病毒載體編碼至少所述第一蛋白質亞基，所述第二病毒載體編碼至少所述第二蛋白質亞基，其中所述第一病毒載體和所述第二病毒載體是不同的病毒載體；或

(ii)向所述植物、所述植物組織或所述植物細胞提供編碼至少所述第一和所述第二蛋白質亞基的正義單鏈RNA病毒載體。

2.根據權利要求1的方法，接著從所述植物、所述植物組織或所述植物細胞分離所述異源寡聚蛋白質。

3.根據權利要求1或2的方法，其中編碼至少所述第一和所述第二蛋白質亞基的所述RNA病毒載體含有編碼所述第一蛋白質亞基的第一異源序列和編碼所述第二蛋白質亞基的第二異源序列，其中所述第一和/或所述第二蛋白質亞基的表達在亞基因組啟動子的控制下。

4.根據權利要求1或2的方法，其中編碼至少所述第一和所述第二蛋白質亞基的所述RNA病毒載體含有編碼所述第一蛋白質亞基的第一異源序列和編碼所述第二蛋白質亞基的第二異源序列，其中所述第一和/或所述第二蛋白質亞基的表達在IRES元件的控制下。

5.根據權利要求1至4的任一項的方法，其中編碼至少所述第一和所述第二蛋白質亞基的所述RNA病毒載體缺少編碼所述病毒載體系統移動功能性蛋白質的ORF。

6.根據權利要求1或2的方法，其中所述第一病毒載體含有編碼所述第一蛋白質亞基的第一異源序列，而所述第二病毒載體含有編碼所述第二蛋白質亞基的第二異源序列，其中所述第一和/或所述第二蛋白質亞基的表達在亞基因組啟動子的控制下。

7.根據權利要求1或2的方法，其中所述第一病毒載體含有編碼所述第一蛋白質亞基的第一異源序列，而所述第二病毒載體含有編碼所述第二蛋白質亞基的第二異源序列，其中所述第一和/或所述第二蛋白質亞基的表達在IRES元件的控制下。

8.根據權利要求1至7的任一項的方法，其中編碼至少所述第一和所述第二蛋白質亞基的所述病毒載體、所述第一病毒載體和/或所述第二病毒載體缺少功能性包被蛋白ORF、功能性移動蛋白ORF和/或組裝病毒顆粒的功能性起點。

9.根據權利要求1至8的任一項的方法，其中所述第一病毒載體衍生自屬于馬鈴薯X病毒屬的病毒，而所述第二病毒載體衍生自屬于馬鈴薯Y病毒屬的病毒。

10.根據權利要求9的方法，其中所述第一病毒載體衍生自馬鈴薯病毒X，而所述第二病毒載體衍生自馬鈴薯病毒Y。

11.根據權利要求1至8的任一項的方法，其中所述第一病毒載體衍生自屬于馬鈴薯X病毒屬的病毒，而所述第二病毒載體衍生自屬于煙草花葉病毒屬的病毒。

12.根據權利要求11的方法，其中所述第一病毒載體衍生自馬鈴薯病毒X，而所述第二病毒載體衍生自煙草花葉病毒。

13.根據權利要求1至12的任一項的方法，其中所述第一和所述第二病毒載體具有至多60％的序列同源性。

14.根據權利要求1至13的任一項的方法，其中所述異源寡聚蛋白質是抗體。

15.根據權利要求1至14的任一項的方法，其中向所述植物、植物組織或植物細胞瞬時提供所述病毒載體。

16.根據權利要求15的方法，其中通過農桿菌轉染向所述植物、植物組織或植物細胞瞬時提供所述病毒載體。

17.根據權利要求1至14的任一項的方法，其中將所述RNA病毒載體作為所述RNA病毒載體的DNA前體穩定摻入植物染色體DNA。

18.根據權利要求17的方法，其中通過可誘導的啟動子提供來自所述DNA前體的所述RNA病毒載體的受控釋放。

19.根據權利要求1至18的任一項的方法，其中至少所述第一或所述第二蛋白質亞基具有植物特異性信號肽作為ER靶向信號。

20.根據權利要求19的方法，其中所述植物特異性信號肽衍生自煙草鈣網蛋白和/或稻α淀粉酶。