[發(fā)明專利]使用正義單鏈病毒RNA載體在植物中生產(chǎn)抗體

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200680003264.6
• 申請(qǐng)日: 2006-01-27
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101115842A
• 公開(kāi)（公告）日: 2008-01-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: A·吉里奇;S·馬里約內(nèi);V·克利姆克;Y·格萊巴
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 愛(ài)康遺傳有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/82
• 分類號(hào): C12N15/82;C12N15/67;C12N15/63
• 代理公司: 北京市中咨律師事務(wù)所
• 代理人: 黃革生;隗永良

1.在植物、植物組織或植物細(xì)胞中產(chǎn)生包含至少第一和第二蛋白質(zhì)亞基的異源寡聚蛋白質(zhì)的方法，所述方法包括在植物細(xì)胞中通過(guò)以下方式表達(dá)至少所述第一和第二蛋白質(zhì)亞基：

(i)向所述植物、所述植物組織或所述植物細(xì)胞提供第一和第二正義單鏈RNA病毒載體，所述第一病毒載體編碼至少所述第一蛋白質(zhì)亞基，所述第二病毒載體編碼至少所述第二蛋白質(zhì)亞基，其中所述第一病毒載體和所述第二病毒載體是不同的病毒載體；或

(ii)向所述植物、所述植物組織或所述植物細(xì)胞提供編碼至少所述第一和所述第二蛋白質(zhì)亞基的正義單鏈RNA病毒載體。

2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，接著從所述植物、所述植物組織或所述植物細(xì)胞分離所述異源寡聚蛋白質(zhì)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的方法，其中編碼至少所述第一和所述第二蛋白質(zhì)亞基的所述RNA病毒載體含有編碼所述第一蛋白質(zhì)亞基的第一異源序列和編碼所述第二蛋白質(zhì)亞基的第二異源序列，其中所述第一和/或所述第二蛋白質(zhì)亞基的表達(dá)在亞基因組啟動(dòng)子的控制下。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或2的方法，其中編碼至少所述第一和所述第二蛋白質(zhì)亞基的所述RNA病毒載體含有編碼所述第一蛋白質(zhì)亞基的第一異源序列和編碼所述第二蛋白質(zhì)亞基的第二異源序列，其中所述第一和/或所述第二蛋白質(zhì)亞基的表達(dá)在IRES元件的控制下。

5.根據(jù)權(quán)利要求1至4的任一項(xiàng)的方法，其中編碼至少所述第一和所述第二蛋白質(zhì)亞基的所述RNA病毒載體缺少編碼所述病毒載體系統(tǒng)移動(dòng)功能性蛋白質(zhì)的ORF。

6.根據(jù)權(quán)利要求1或2的方法，其中所述第一病毒載體含有編碼所述第一蛋白質(zhì)亞基的第一異源序列，而所述第二病毒載體含有編碼所述第二蛋白質(zhì)亞基的第二異源序列，其中所述第一和/或所述第二蛋白質(zhì)亞基的表達(dá)在亞基因組啟動(dòng)子的控制下。

7.根據(jù)權(quán)利要求1或2的方法，其中所述第一病毒載體含有編碼所述第一蛋白質(zhì)亞基的第一異源序列，而所述第二病毒載體含有編碼所述第二蛋白質(zhì)亞基的第二異源序列，其中所述第一和/或所述第二蛋白質(zhì)亞基的表達(dá)在IRES元件的控制下。

8.根據(jù)權(quán)利要求1至7的任一項(xiàng)的方法，其中編碼至少所述第一和所述第二蛋白質(zhì)亞基的所述病毒載體、所述第一病毒載體和/或所述第二病毒載體缺少功能性包被蛋白ORF、功能性移動(dòng)蛋白ORF和/或組裝病毒顆粒的功能性起點(diǎn)。

9.根據(jù)權(quán)利要求1至8的任一項(xiàng)的方法，其中所述第一病毒載體衍生自屬于馬鈴薯X病毒屬的病毒，而所述第二病毒載體衍生自屬于馬鈴薯Y病毒屬的病毒。

10.根據(jù)權(quán)利要求9的方法，其中所述第一病毒載體衍生自馬鈴薯病毒X，而所述第二病毒載體衍生自馬鈴薯病毒Y。

11.根據(jù)權(quán)利要求1至8的任一項(xiàng)的方法，其中所述第一病毒載體衍生自屬于馬鈴薯X病毒屬的病毒，而所述第二病毒載體衍生自屬于煙草花葉病毒屬的病毒。

12.根據(jù)權(quán)利要求11的方法，其中所述第一病毒載體衍生自馬鈴薯病毒X，而所述第二病毒載體衍生自煙草花葉病毒。

13.根據(jù)權(quán)利要求1至12的任一項(xiàng)的方法，其中所述第一和所述第二病毒載體具有至多60％的序列同源性。

14.根據(jù)權(quán)利要求1至13的任一項(xiàng)的方法，其中所述異源寡聚蛋白質(zhì)是抗體。

15.根據(jù)權(quán)利要求1至14的任一項(xiàng)的方法，其中向所述植物、植物組織或植物細(xì)胞瞬時(shí)提供所述病毒載體。

16.根據(jù)權(quán)利要求15的方法，其中通過(guò)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)染向所述植物、植物組織或植物細(xì)胞瞬時(shí)提供所述病毒載體。

17.根據(jù)權(quán)利要求1至14的任一項(xiàng)的方法，其中將所述RNA病毒載體作為所述RNA病毒載體的DNA前體穩(wěn)定摻入植物染色體DNA。

18.根據(jù)權(quán)利要求17的方法，其中通過(guò)可誘導(dǎo)的啟動(dòng)子提供來(lái)自所述DNA前體的所述RNA病毒載體的受控釋放。

19.根據(jù)權(quán)利要求1至18的任一項(xiàng)的方法，其中至少所述第一或所述第二蛋白質(zhì)亞基具有植物特異性信號(hào)肽作為ER靶向信號(hào)。

20.根據(jù)權(quán)利要求19的方法，其中所述植物特異性信號(hào)肽衍生自煙草鈣網(wǎng)蛋白和/或稻α淀粉酶。