[發明專利]優化的小片段RNA載體系統及其構建方法

有效

• 申請號: 200610166613.8
• 申請日: 2006-12-31
• 公開（公告）號: CN101210253A
• 公開（公告）日: 2008-07-02
• 發明（設計）人: 李超;封江南;黃俊;黃映雪;孫永林;張云;康德嬌;嚴俊
• 申請（專利權）人: 國營武昌造船廠
• 主分類號: C12N15/66
• 分類號: C12N15/66;C07H21/02
• 代理公司: 武漢開元專利代理有限責任公司
• 代理人: 樊戎;夏惠忠

1.一種優化的小片段RNA載體系統及其構建方法，其特征在于包括以下步驟：

(1)以晶賽公司的編碼多條shRNA質粒載體pEGFP6-1為骨架進行啟動子序列，生物元件布局及篩選基因插入等一系列改造從而構建出優化的編碼小片段RNA載體pGenesil-1.2；(2)化學合成編碼各小片段RNA所需的DNA模板并構建入pGenesil-1.2中，然后利用此系統中的雙重篩選方案篩選克隆并經測序鑒定完成構建工作；(3)將構建成功的編碼小片段RNA表達載體經多方面的有益性評價及實際應用效果測定。

2.根據權利要求1所述的一種優化的小片段RNA載體系統及其構建方法，其特征在于利用BbsI，Esp3I，BsaI等限制性內切酶的消化位點在識別位點旁邊且消化位點序列沒有特異性的特性，在引入插入模板DNA片段的酶切位點時確保了啟動子3’端沒有任何突變。

3.根據權利要求1所述的一種優化的小片段RNA載體系統及其構建方法，其特征在于在載體的插入模板DNA的位置預先插入標簽基因表達框，以在菌落水平提供一種篩選機制。

4.根據權利要求1所述的一種優化的小片段RNA載體系統及其構建方法，其特征在于提供一種設計使得只有模板DNA片段插入時才會形成一個載體中原始位置所沒有的酶切位點，從而提供一種有效的重組子鑒定手段。

5.根據權利要求1所述的一種優化的小片段RNA載體系統及其構建方法，其特征在于載體的元件排布上將CMV增強子和hU6啟動子緊鄰排布，從而有效利用CMV的增強子來提高hU6啟動子的啟動效率。