[發明專利]一種纖溶酶及其培制方法有效
| 申請號： | 200610163479.6 | 申請日： | 2006-12-04 |
| 公開（公告）號： | CN101134951A | 公開（公告）日： | 2008-03-05 |
| 發明（設計）人： | 劉曉蘭;鄭喜群;鄧永平;吳耘紅 | 申請（專利權）人： | 齊齊哈爾大學 |
| 主分類號： | C12N9/68 | 分類號： | C12N9/68;C12N1/14 |
| 代理公司： | 齊齊哈爾鶴城專利事務所 | 代理人： | 葉仲剛 |
| 地址： | 161006黑龍江省齊齊哈爾市龍沙*** | 國省代碼： | 黑龍江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 纖溶酶 及其 方法 | ||
1.一種纖溶酶，以保藏號為CGMCC?No.1836的好食脈孢霉(N.sitophila)菌株17號為菌種，經培養發酵、分離和提純制成，該纖溶酶由兩個亞基組成，相對分子量分別為30000和15500，等電點為7.9±0.2。
2.一種如權利要求1所述的纖溶酶的培制方法，包括以下步驟：以好食脈孢霉(N.sitophila)菌株17號為菌種，經過斜面培養、固體發酵培養生產纖溶酶，從發酵產物中分離純化纖溶酶。
3.如權利要求2所述的纖溶酶的培制方法：斜面保存采用葡萄糖瓊脂培養基，28～30℃培養4天，發酵培養基含豆渣、麩皮和無機鹽，28～30℃培養48小時，用生理鹽水對固體發酵產物浸提6小時，經紗布過濾得到過濾液。
4.如權利要求3所述的纖溶酶的培制方法：將所得到的過濾液經過40～80％飽和度硫酸銨分級鹽析，離心除去雜質，得到粗酶液：采用現代色譜技術純化纖溶酶。
5.如權利要求4所述纖溶酶的培制方法：其粗酶液純化的具體方法如下：
a、Octyl-Sepharose?Fast?Flow疏水相互作用層析：將樣品鹽飽和度調到40％，上樣后用40％～0硫酸銨溶液梯度洗脫，收集有纖溶活性組分；
b、Sephadex?G-25凝膠過濾層析：用pH7.4磷酸鹽緩沖液洗脫，收集有纖溶活性組分；
c、SP-Sephar離子交換層析：樣品脫鹽后上樣，用0～0.8mol/L的NaCl緩沖溶液梯洗，收集有纖溶活性組分；
d、Sephadex?75凝膠過濾層析：用pH7.4磷酸鹽緩沖液洗脫，收集有纖溶活性組分。
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