[發(fā)明專利]一種檢測(cè)人源化抗CD52抗體生物活性的方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200610147289.5
• 申請(qǐng)日: 2006-12-14
• 公開（公告）號(hào): CN101201358A
• 公開（公告）日: 2008-06-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 侯盛;王皓;寇庚;李博華;郭亞軍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海國(guó)健生物技術(shù)研究院
• 主分類號(hào): G01N33/577
• 分類號(hào): G01N33/577;G01N33/554
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• 代理人: 暫無信息

1.一種檢測(cè)人源化抗CD52抗體生物活性的方法，此方法包括對(duì)樣品及已知活性的參比品進(jìn)行稀釋、利用CD52陽性細(xì)胞進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合試驗(yàn)、流式細(xì)胞儀檢測(cè)和結(jié)果計(jì)算幾個(gè)步驟，其中競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合試驗(yàn)步驟中所用的CD52陽性細(xì)胞為CHO-C細(xì)胞。

2.權(quán)利要求1所述的CHO-C細(xì)胞，通過人CD52?cDNA的獲取、表達(dá)載體構(gòu)建、轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞及篩選獲得；其中人CD52?cDNA的獲取和表達(dá)載體構(gòu)建過程包括引物序列的設(shè)計(jì)、人CD52特異片段的獲得及將該片段裝入表達(dá)載體。

3.權(quán)利要求2所述的CHO-C細(xì)胞，其有義引物序列如SEQ?ID?NO.1所示，反義引物序列如SEQ?ID?NO.2所示。

4.權(quán)利要求2所述的CHO-C細(xì)胞的表達(dá)載體，可以為pcDNA3.1、pcDNA4、pCEP4、pREP4之一。

5.權(quán)利要求4所述的CHO-C細(xì)胞的表達(dá)載體，為pcDNA3.1。

6.權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，包括：

1.用PBSS分別稀釋參比品和待測(cè)樣品到一定濃度；

2.用異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記的人源化抗CD52單抗繼續(xù)稀釋參比品和待測(cè)樣品的稀釋液；

3.將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的CHO-C細(xì)胞，細(xì)胞懸液分至流式專用管中；

4.將2得到的序列稀釋液加入3中，并設(shè)相應(yīng)對(duì)照組；

上機(jī)檢測(cè)，計(jì)算結(jié)果。