[發(fā)明專利]一種丹酚酸B化學(xué)對(duì)照品的分離制備方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200610135097.2
• 申請(qǐng)日: 2006-12-27
• 公開（公告）號(hào): CN101210002A
• 公開（公告）日: 2008-07-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 肖紅斌;高明哲
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所
• 主分類號(hào): C07D307/80
• 分類號(hào): C07D307/80
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標(biāo)代理有限公司
• 代理人: 許宗富;周秀梅

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種從丹參提取物中分離獲得純度大于98％的丹酚酸B化學(xué)對(duì)照品的制備方法。

背景技術(shù)

丹參是我國(guó)傳統(tǒng)藥學(xué)中常用藥物之一，有悠久的臨床應(yīng)用歷史。現(xiàn)代藥理研究表明，丹酚酸B具有很強(qiáng)的抗氧化作用，可以清除體內(nèi)的超氧陰離子和羥基自由基；丹酚酸B對(duì)多種原因引起的血小板聚集和血栓形成，無論是體內(nèi)或體外試驗(yàn)，均有明顯的抑制作用，且不影響凝血系統(tǒng)功能，無出血危險(xiǎn)性；丹酚酸B能保護(hù)局限性腦缺血-再灌注所致的線粒體損傷并抑制腦缺血——再灌注導(dǎo)致的神經(jīng)細(xì)胞凋亡。在防治腦缺血和老年癡呆等急慢性神經(jīng)退行性疾病有良好的前景。是丹參復(fù)方制劑治療冠心病、心腦血管疾病的重要藥效成分。我國(guó)2005版國(guó)家藥典中把丹酚酸B作為測(cè)量成分，并規(guī)定其在丹參藥材中的含量應(yīng)達(dá)3％以上。

目前丹酚酸B的提取分離方法主要采用如下步驟：藥材提取——除雜——柱層析過程。不同提取分離過程的區(qū)別在于除雜所用所用方法及柱層析所用色譜柱不同。黎蓮娘等(中國(guó)專利CN1384090A，2002年公開)采用乙醇沉淀，使用大孔吸附樹脂柱分離，獲得含40％丹酚酸B的多酚酸提取物；張國(guó)力等(中國(guó)專利CN1528756A，2004年公開)采用殼聚糖絮凝沉淀，再用乙酸乙酯萃取，最后用硅膠柱層析獲得純度在50％-96％的丹酚酸B樣品；徐亞明等(中國(guó)專利CN1247855A，2000年公開)采用大孔吸附樹脂，用水洗后，以不同濃度的甲醇洗脫，獲得以丹酚酸B鎂鹽為主成分的丹參多酚酸提取物；魏峰等(中國(guó)專利CN1459448A，2003年12月公開)采用聚酰胺柱和大孔吸附樹脂柱，收集獲得總酚酸，總酚酸含量大于80％，其中丹酚酸B含量大于50％。張鳳俠等報(bào)道(中國(guó)專利CN1164582C，2004年公開)采用多種填料類型的色譜柱獲得純度在90％以上的丹酚酸B。

以上方法均在不同程度上考慮了丹參提取物中的其他成分對(duì)丹酚酸B提取分離過程的影響，使丹酚酸B與其他成分得到良好分離，獲得不同純度的丹酚酸B。但由于缺少高效的柱分離方法及相應(yīng)檢測(cè)方法，不能穩(wěn)定獲得純度在98％以上的丹酚酸B化學(xué)對(duì)照品。

發(fā)明內(nèi)容

為克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，優(yōu)化分離條件，本發(fā)明的目的在于提供一種分離時(shí)間短、分離效果好、產(chǎn)品純度高(純度在98％以上)的丹酚酸B化學(xué)對(duì)照品的分離制備方法。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案：對(duì)照品的分離制備方法，以重量含量10～97％的丹酚酸B提取物為原料，以制備型高效液相色譜為分離手段，以甲醇-酸水溶液為洗脫體系，具體步驟為：

(1)樣品預(yù)處理：將重量含量10～97％的丹酚酸B提取物用甲醇、乙醇水溶液溶解，配置成重量濃度為8～60mg/ml的丹酚酸B提取物溶液，經(jīng)0.22～0.45μm微孔濾膜過濾；

(2)色譜柱處理：高效液相色譜柱選擇制備型高效液相色譜柱，以5-20倍柱體積的洗脫體系溶液平衡色譜柱；洗脫體系溶液為甲醇-酸水溶液，其中甲醇于甲醇-酸水溶液中的體積濃度為50-80％；酸于酸水溶液的體積濃度為0.1～1％；

(3)進(jìn)樣：將過濾后的樣品溶液通過六通閥或泵進(jìn)樣，進(jìn)樣體積為1～100ml；

(4)洗脫：采用洗脫體系溶液洗脫色譜柱，流速控制在10～600ml/min，在線紫外監(jiān)測(cè)，收集含有丹酚酸B的洗脫液；

(5)丹酚酸B化學(xué)對(duì)照品的獲取：減壓濃縮所收集到的丹酚酸B洗脫液，至濃縮液中無甲醇，冷凍干燥。

丹酚酸B的結(jié)構(gòu)式如下：

所述制備型高效液相柱可以選用商品化或自己裝填的制備型高效液相柱；其填料可為C8或C18鍵合相填料；自己裝填的制備型高效液相柱裝填方式為濕法裝柱，填料粒徑為5～20μm，柱效在2000以上；洗脫體系中的酸可為甲酸或乙酸；在線紫外監(jiān)測(cè)，其監(jiān)測(cè)波長(zhǎng)為254nm～290nm；丹酚酸B洗脫液收集后，減壓濃縮，濃縮溫度控制在55～65℃。

以本方法從丹參提取物中分離丹酚酸B化學(xué)對(duì)照品具有如下優(yōu)點(diǎn)和進(jìn)步：

1.本發(fā)明以制備型高效液相為分離手段，使丹酚酸B得到高效分離，可以獲得純度在98％以上的丹酚酸B化學(xué)對(duì)照品，同時(shí)縮短分離時(shí)間。

2.本發(fā)明所述的甲醇-酸水洗脫體系能有效的保證丹酚酸B與其他成分得到有效分離，從而保證分離的效果。

3.本發(fā)明采用紫外檢測(cè)器在線檢測(cè)，使丹酚酸B的分離情況可以直接檢測(cè)，并可以選擇性收集，顯著提高收集效果。

4.本發(fā)明所述方法操作簡(jiǎn)便，條件溫和，能有效的保證丹酚酸B的穩(wěn)定性。