[發(fā)明專利]人乳頭瘤病毒16型外殼蛋白病毒樣顆粒及其制備方法和用途有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 200610127387.2 | 申請日： | 2006-09-18 |
| 公開（公告）號： | CN101148661A | 公開（公告）日： | 2008-03-26 |
| 發(fā)明（設計）人： | 許雪梅;許于飛;張洪濤;宋國興;司靜懿;劉世德 | 申請（專利權）人： | 中國醫(yī)學科學院基礎醫(yī)學研究所 |
| 主分類號： | C12N15/09 | 分類號： | C12N15/09;C12N15/866;C12N15/12;C07K19/00;C12N1/21;C12N5/10;C12N7/01;A61K48/00;A61P35/00 |
| 代理公司： | 北京紀凱知識產(chǎn)權代理有限公司 | 代理人： | 程偉 |
| 地址： | 1000*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 乳頭 病毒 16 外殼 蛋白 顆粒 及其 制備 方法 用途 | ||
1.一種病毒樣顆粒，其特征在于該病毒樣顆粒由選自序列為SEQ?ID?N0.1的HPV16L1N基因、HPV16L1N/L2基因或核苷酸序列為SEQ?ID?NO.2的HPV16L1N/L2-LTK63嵌合基因所編碼，該病毒樣顆粒由下列步驟獲得：
1)使用pFastBacDual-HPV16L1N、pFastBacDual-HPV16L1N/L2或pFastBacDual-HPV16L1N/L2-LTK63linkB重組質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)化感受態(tài)大腸桿菌DH10Bac；
2)篩選鑒定獲得分別重組有HPV16L1N基因、HPV16L1N/L2基因或HPV16L1N/L2-LTK63linkB基因的重組Bacmid；
3)將所述重組Bacmid轉(zhuǎn)染對數(shù)生長期的昆蟲細胞，轉(zhuǎn)染后收集上清，獲得含有HPV16L1N基因、HPV16L1N/L2基因或HPV16L1N/L2-LTK63linkB基因的重組桿狀病毒；
4)用所述含有HPV16L1N基因、HPV16L1N/L2基因或HPV16L1N/L2-LTK63linkB基因的重組桿狀病毒感染對數(shù)生長期的Sf9昆蟲細胞，使重組桿狀病毒在感染細胞內(nèi)分別表達導入的HPV16L1N基因、HPV16L1N/L2基因或HPV16L1N/L2-LTK63基因；
5)裂解感染有含HPV16L1N基因、HPV16L1N/L2基因或HPV16L1N/L2-LTK63linkB基因的重組桿狀病毒的細胞，純化獲得HPV16L1NVLPs、HPV16L1N/L2VLPs或HPV16L1N/L2-LTK63嵌合病毒樣顆粒。
2.根據(jù)權利要求1所述的病毒樣顆粒，其中所述的pFastBacDual-HPV16L1N/L2重組質(zhì)粒于2006年9月7日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，其保藏號為CGMCC?ID?NO.1802。
3.根據(jù)權利要求1所述的病毒樣顆粒，其中所述的pFastBacDual-HPV16L1N/L2-LTK631inkB重組質(zhì)粒于2006年9月7日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，其保藏號為CGMCC?ID?NO.1803。
4.一種序列號為SEQ?ID?NO.1所示核苷酸序列的HPV16L1N基因。
5.一種序列號為SEQ?ID?NO.2所示核苷酸序列的融合基因L2-LTK63。
6.根據(jù)權利要求5所述的融合基因L2-LTK63，其編碼的蛋白質(zhì)具有SEQID?NO.3所示的氨基酸序列。
7.一種含有HPV16L1N基因的pFastBacDual-HPV16L1N重組質(zhì)粒，其特征在于HPV16L1N基因位于PH啟動子的下游。
8.一種保藏號為CGMCC?NO.1802的pFastBacDual-HPV16L1N/L2重組質(zhì)粒，其特征在于含有位于P10啟動子下游的HPV16L2基因。
9.一種保藏號為CGMCC?NO.1803的pFastBacDual-HPV16L1N/L2-LTK631inkerB重組質(zhì)粒，其特征在于含有位于P10啟動子下游的L2-LTK63基因。
10.含有如權利要求1所述HPV16L1N基因、HPV16L1N/L2基因或HPV16L1N/L2-LTK63嵌合基因的重組Bacmid。
11.含有如權利要求10所述的重組bacmid的大腸桿菌DH?10Bac菌株。
12.含有如權利要求10所述的重組Bacmid的昆蟲Sf9細胞。
13.如權利要求12所述的昆蟲Sf9細胞表達的重組桿狀病毒。
14.如權利要求1所述的病毒樣顆粒在制備用于預防HPV16病毒的感染以及感染誘發(fā)的宮頸或外陰部位的癌前病變及惡性腫瘤的疫苗中的應用。
15.根據(jù)權利要求14所述的應用，其中所述的惡性腫瘤是與HPV16感染相關的宮頸癌、陰莖癌、口腔鱗狀細胞癌、食道癌或前列腺癌。
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