[發(fā)明專利]抗病毒基因MxA熒光定量試劑盒及檢測方法無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 200610119308.3 | 申請日： | 2006-12-07 |
| 公開（公告）號： | CN101195844A | 公開（公告）日： | 2008-06-11 |
| 發(fā)明（設計）人： | 張欣欣;孔曉飛 | 申請（專利權）人： | 上海交通大學醫(yī)學院附屬瑞金醫(yī)院 |
| 主分類號： | C12Q1/70 | 分類號： | C12Q1/70;C12Q1/68;G01N21/64 |
| 代理公司： | 上海翼勝專利商標事務所 | 代理人： | 翟羽 |
| 地址： | 20002*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 抗病毒 基因 mxa 熒光 定量 試劑盒 檢測 方法 | ||
1.一種抗病毒基因MxA熒光定量試劑盒，包括：MxA和管家基因GAPDH擴增引物，dNTP，用于PCR反應的DNA聚合酶及其緩沖液的一種或多種。
2.根據(jù)權利要求1所述的試劑盒，其特征在于：
MxA：正向引物：-2040F：5’GTCCAGCTCGGCAACAGACT3’，
反向引物：-2157R：5’CATGAAGAACTGGATGATCA?AAGG3’，
探針：-2093T：5’FAM-CCTATCACCAGGAGGCCAGCAAG?CG3’TARMA。
3.根據(jù)權利要求1所述的試劑盒，其特征在于：
GAPDH：正向引物：-81F：5’GAAGGTGAAGGTCGGAGTC3’，
反向引物：-287R：5’GAAGATG?GTGATGGGATTTC3’，
探針：-258T：5’FAM-CAAGCTTCCCGTTC?TCAGCC3’TARMA。
4.根據(jù)權利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述的PCR緩沖液中含有1X?Buffer，2mM?MgCl2，200μM?dNTP，1U?Taq酶，正反向引物均500nM，探針為200nM。
5.一種利用權利要求1所述的抗病毒基因MxA熒光定量試劑盒檢測方法，包括以下步驟：
(1)、采集外周血單個核細胞PBMC；
(2)、干擾素刺激PBMC細胞；
(3)、構(gòu)建含MxA和管家基因GAPDH目的基因片段的TA克隆；
(4)、采用實時熒光PCR檢測MxA?mRNA的誘導表達；
(5)、根據(jù)標準曲線和域值，判斷樣本的Ct值。
6.根據(jù)權利要求5所述的檢測方法，其特征在于：步驟(2)中體外使用10000IU/ml干擾素刺激100萬個PBMC。
7.根據(jù)權利要求5所述的檢測方法，其特征在于：步驟(4)中在ABI-RPISM7000進行實時熒光PCR，PCR擴增反應為58℃2min，95℃15Sec，59℃45Sec，40個循環(huán)。
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