[發明專利]一種雙功能融合蛋白及其制備方法和應用無效
| 申請號： | 200610117831.2 | 申請日： | 2006-11-01 |
| 公開（公告）號： | CN101173008A | 公開（公告）日： | 2008-05-07 |
| 發明（設計）人： | 熊思東;儲以微;楊秀利;王纓 | 申請（專利權）人： | 復旦大學 |
| 主分類號： | C07K19/00 | 分類號： | C07K19/00;C12N15/62;A61K38/16;C12N15/09;A61P35/00 |
| 代理公司： | 上海世貿專利代理有限責任公司 | 代理人： | 嚴新德 |
| 地址： | 20043*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 功能 融合 蛋白 及其 制備 方法 應用 | ||
1.一種雙功能融合蛋白，其特征在于：所述的雙功能融合蛋白包括有兩個功能結構域，其中的一個功能結構域由模擬小鼠趨化因子ITAC的N端及N-LOOP區組成，其中的另一個功能結構域由小鼠IP-10的C端組成，所述的兩個功能結構域通過限制性酶切位點進行連接。
2.根據權利要求1所述的雙功能融合蛋白，其特征在于：模擬小鼠趨化因子ITAC的N端及N-LOOP區具有SEQ?ID?NO：1所示的氨基酸序列，小鼠IP-10的C端具有SEQ?ID?NO：2所示的氨基酸序列。
3.根據權利要求1所述的雙功能融合蛋白，其特征在于：所述的兩個功能結構域通過限制性酶切位點HindIII進行連接。
4.一種DNA分子，其特征在于：編碼權利要求1所述的雙功能融合蛋白。
5.如權利要求4所述的DNA分子，其特征在于：具有SEQ?ID?NO：5所示的堿基序列。
6.一種載體，其特征在于：所述的載體中含有權利要求4所述的DNA分子。
7.一種細胞，其特征在于：含有權利要求6所述的載體。
8.一種藥物組合物，其特征在于：含有有效量的權利要求1所述的雙功能融合蛋白和藥學上可接受的載體。
9.一種制備如權利要求1所述的雙功能融合蛋白的方法，其特征在于，所述的方法包含以下步驟：
1)合成ITAC的N端及N-LOOP區編碼基因，所述的ITAC的N端及N-LOOP區編碼基因含有SEQ?ID?NO：3所示的堿基序列；
2)合成IP-10的C端編碼基因，所述的IP-10的C端編碼基因含有SEQ?ID?NO：4所示的堿基序列；
3)將兩個基因編碼片段通過限制性內切酶切出粘性末端，通過連接酶連接產物作為模板，再用ITAC的N端上游引物及IP-10的C端下游引物，PCR方法大量擴增雙功能分子的全長編碼基因，將雙功能分子的編碼基因克隆入質粒，構建含有雙功能全長編碼基因的質粒；
4)將3)步驟中獲得的含有雙功能全長編碼基因轉染細胞，經篩選獲得穩定轉染含有雙功能全長編碼基因的細胞株，通過細胞株的表達，獲得所述的雙功能融合蛋白。
10.如權利要求9所述的雙功能融合蛋白的制備方法，其特征在于：所述的質粒為pcDNA3質粒。
11.如權利要求9所述的雙功能融合蛋白的制備方法，其特征在于：所述的連接酶為T4DNA。
12.如權利要求9所述的雙功能融合蛋白的制備方法，其特征在于：所述的細胞為4T1細胞。
13.權利要求1所述的雙功能融合蛋白在制備治療腫瘤藥物中的應用。
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