[發明專利]弓形蟲免疫金標快速檢測試劑及制備方法

無效

• 申請號: 200610104848.4
• 申請日: 2006-10-29
• 公開（公告）號: CN101169413A
• 公開（公告）日: 2008-04-30
• 發明（設計）人: 張德林;王艷華;李學瑞;才學鵬
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蘭州獸醫研究所
• 主分類號: G01N33/544
• 分類號: G01N33/544;G01N33/532
• 代理公司: 甘肅省知識產權事務中心
• 代理人: 鮮林

1.一種弓形蟲免疫金標快速檢測試劑，該試劑包括樣品墊、結合墊、硝酸纖維素膜、吸水墊和PVC背襯，PVC背襯一端依次粘附樣品墊、結合墊、硝酸纖維素膜、吸水墊，其特征在于上述結合墊包被了帶有弓形蟲代謝分泌抗原的膠體金結合物，上述硝酸纖維素膜上以線形包被了弓形蟲代謝分泌抗原和抗弓形蟲抗體。

2.根據權利要求1所述的弓形蟲免疫金標快速檢測試劑的制備方法，其特征在于按下述方法制備：

a、制備弓形蟲代謝分泌抗原：20～25克體重小鼠每只按1×10⁵～1×10⁶弓形蟲速殖子腹腔接種，經3～4日，小鼠出現精神沉郁、不食、被毛粗亂等癥狀時，脫頸致死小白鼠，浸泡于70～75％酒精內體表消毒；每只小鼠用2-3毫升PH7.20.15mol/L?PBS緩沖液洗腹收集蟲體；將所收集的腹腔液以3000～4000rpm離心30～40分種，收集上清液；將上清液在-20℃溫度下放置24～48小時，凍融化開后再次以3000～4000rpm離心30～40分鐘，離心2～3次，收集上清液；上清液即為弓形蟲代謝分泌抗原；

b、制備抗弓形蟲抗體：用弓形蟲抗原免疫羊，瓊擴檢測達1∶32～64時，采集免疫羊血清，用飽和硫酸法粗提取羊抗弓形蟲抗體，再用凝膠層析法純化羊抗弓形蟲抗體；

c、制備膠體金：用檸檬酸三鈉將氯金酸還原成40～60納米的膠體金顆粒；

d、制備弓形蟲代謝分泌抗原膠體金標記物：將膠體金與弓形蟲代謝分泌抗原按1∶0.02(ml/mg)比例攪拌混勻，使之形成穩定的復合物，通過純化濃縮形成弓形蟲代謝分泌抗原膠體金標記物；

e、將弓形蟲代謝分泌抗原膠體金標記物包被在膠體金結合墊上，將弓形蟲代謝分泌抗原和抗弓形蟲抗體以線形包被在硝酸纖維膜的檢測區和滯控區，充分干燥。