[發(fā)明專利]用金磁微粒純化DNA的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200610104755.1
• 申請(qǐng)日: 2006-10-19
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101165182A
• 公開(kāi)（公告）日: 2008-04-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 崔亞麗;陳超;曹樹(shù)輝
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 陜西西大北美基因股份有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/10
• 分類號(hào): C12N15/10
• 代理公司: 西安智邦專利商標(biāo)代理有限公司
• 代理人: 王少文

1.一種用金磁微粒純化DNA的方法，其特征在于：該方法包括以下步驟：

1]制備含有DNA的液態(tài)樣品：用裂解液將細(xì)胞或組織等樣品裂解得到含有DNA的液態(tài)樣品，或者對(duì)DNA分離凝膠進(jìn)行溶解得到含有DNA的液態(tài)樣品，或者直接使用PCR擴(kuò)增產(chǎn)物中含有DNA的液態(tài)樣品；

2]將金磁微粒和含有DNA的液態(tài)樣品混合：將金磁微粒與含有DNA的液態(tài)樣品混合，加入偶聯(lián)緩沖液，形成含有金磁微粒-DNA復(fù)合物的混合溶液；所述偶聯(lián)緩沖液為聚乙二醇和鹽的混合溶液，其中聚乙二醇的分子量在6000～10000之間，濃度為10％～35％，其中的鹽是氯化鈉、氯化鋰、氯化鋇、氯化鉀、氯化鈣、氯化鎂或氯化銫，濃度為0.5M～5.0M；

3]將金磁微粒-DNA復(fù)合物從混合溶液中分離：將混合溶液磁性分離，棄上清，用清洗緩沖液清洗金磁微粒，重復(fù)磁性分離，直至上清澄清，移除上清，得金磁微粒-DNA復(fù)合物；所述的清洗緩沖液為50％～100％的乙醇溶液；

4]將吸附在金磁微粒表面的DNA洗脫：用洗脫緩沖液對(duì)金磁微粒進(jìn)行洗脫，磁性分離至上清澄清，所得上清即為純化后的DNA的液態(tài)樣品，所述洗脫緩沖液為水或pH＝7.0～9.0的TE緩沖液。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用金磁微粒純化DNA的方法，其特征在于：所述方法包括金磁微粒的再生步驟：將吸附在金磁微粒表面的DNA洗脫完畢，磁性分離后的金磁微粒可以重復(fù)使用或是保存在預(yù)處理緩沖液中備用。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用金磁微粒純化DNA的方法，其特征在于：所述方法包括金磁微粒的預(yù)處理步驟：為了去除影響DNA吸附的游離鐵氧化物，在金磁微粒與含有DNA的液態(tài)樣品混合前，先用預(yù)處理緩沖液對(duì)金磁微粒進(jìn)行清洗，所述預(yù)處理緩沖液為0.1M～1.0M的pH＝6.0～8.5的EDTA溶液。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用金磁微粒純化DNA的方法，其特征在于：所述方法包括金磁微粒的再生步驟：將吸附在金磁微粒表面的DNA洗脫完畢，磁性分離后的金磁微粒可以重復(fù)使用或是保存在預(yù)處理緩沖液中備用。

5.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3或4所述的用金磁微粒純化DNA的方法，其特征在于：所述預(yù)處理緩沖液為0.6M的pH＝7.6的EDTA；所述偶聯(lián)緩沖液為25％的PEG8000和2.0M的氯化鈉的混合溶液；所述清洗緩沖液為75％的乙醇溶液；洗脫緩沖液為pH＝7.6的TE緩沖液。

6.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3或4所述的用金磁微粒純化DNA的方法，其特征在于：所述裂解液包括堿性裂解液、酸性裂解液、碘化鈉裂解液、胍裂解液或SDS裂解液。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的用金磁微粒純化DNA的方法，其特征在于：所述堿性裂解液為裂解液I、裂解液II、裂解液III和RNase?A溶液。

8.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3或4所述的用金磁微粒純化DNA的方法，其特征在于：所述DNA的液態(tài)樣品包括血液、精液、唾液、微生物、植物、質(zhì)粒、凝膠、PCR液及動(dòng)物組織。