[發明專利]用金磁微粒純化DNA的方法

有效

• 申請號: 200610104755.1
• 申請日: 2006-10-19
• 公開（公告）號: CN101165182A
• 公開（公告）日: 2008-04-23
• 發明（設計）人: 崔亞麗;陳超;曹樹輝
• 申請（專利權）人: 陜西西大北美基因股份有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 西安智邦專利商標代理有限公司
• 代理人: 王少文

技術領域

本發明涉及一種對DNA進行純化的方法。

背景技術

DNA純化是分子生物學實驗中的一項關鍵技術，是下游實驗的前提和基礎，純化的質量將直接關系到以后實驗的成功與否，如PCR擴增、酶切反應、從血液、唾液等樣品中純化DNA用于親子鑒定、刑事犯罪的基因鑒定以及從各種組織中純化DNA以構建文庫等。因此尋求快速、高效、簡易、低成本的DNA純化方法一直是人們關注的方向。

目前常用的幾種DNA提取方法均存在一些缺點。酚-氯仿純化方法，雖然適用于大多數生物樣本，但實驗操作時間長、步驟繁瑣、容易造成DNA的污染，也不利于自動化和多個樣本的同時純化，對微量生物樣品DNA純化亦存在困難。此外，酚、氯仿等有機試劑易造成環境污染，有損操作者的健康。Chelex-100方法簡單，其原理基于樹脂的絡合作用，提取的DNA可直接用于PCR擴增，但該方法得到的DNA純度不高而不利于后繼分子生物學實驗的進行，并且這種方法只適用于微量樣品，不適合大量樣品的操作。玻璃珠法依賴于DNA與玻璃珠表面的靜電吸附，優點在于操作簡便，采用物理吸附法純化DNA不需要特殊的設備。但是由于玻璃珠比表面積小，純化效率低，而且不能徹底除去抑制劑，限制了其應用的范圍。

磁珠法是近年來發展迅速的一種DNA純化方法，它具有操作簡單、純化質量高、無酚、氯仿等有機試劑的污染等優點，因此該方法越來越受到人們的親睞。專利ZL?02139818.6采用氨基化二氧化硅磁性納米顆粒快速抽提純化DNA的方法，專利CN?1370230A采用二氧化硅磁性顆粒對DNA的分離和專利CN1535979A用磁性納米復合材料提取DNA的方法都對以磁性材料為載體純化DNA進行了公開，但是現有的磁性材料純化技術中存在純化率低、純度差、操作時間長等缺點。

組裝型磁性復合微粒和核/殼型超順磁性復合微粒的制備方法以及結構組成已經在中國專利ZL?03153486.4和ZL?03124061.5分別進行了公開，但其應用中主要包括分子固定以及相關檢測的內容，未涉及到對DNA進行純化的內容。

發明內容

本發明目的是提供一種用金磁微粒純化DNA的方法，其解決了現有技術對DNA純化效率低、純度差、操作時間長等缺點。

本發明的技術解決方案是：

一種用金磁微粒純化DNA的方法，該方法包括以下步驟：

1]制備含有DNA的液態樣品：用裂解液將細胞或組織等樣品裂解得到含有DNA的液態樣品，或者對DNA分離凝膠進行溶解得到含有DNA的液態樣品，或者直接使用PCR擴增產物中含有DNA的液態樣品；

2]將金磁微粒和含有DNA的液態樣品混合：將金磁微粒與含有DNA的液態樣品混合，加入偶聯緩沖液，形成含有金磁微粒-DNA復合物的混合溶液；所述偶聯緩沖液為聚乙二醇和鹽的混合溶液，其中聚乙二醇的分子量在6000～10000之間，濃度為10％～35％，其中的鹽是氯化鈉、氯化鋰、氯化鋇、氯化鉀、氯化鈣、氯化鎂或氯化銫，濃度為0.5M～5.0M；

3]將金磁微粒-DNA復合物從混合溶液中分離：將混合溶液磁性分離，棄上清，用清洗緩沖液清洗金磁微粒，重復磁性分離，直至上清澄清，移除上清，得金磁微粒-DNA復合物；所述的清洗緩沖液為50％～100％的乙醇溶液；

4]將吸附在金磁微粒表面的DNA洗脫：用洗脫緩沖液對金磁微粒進行洗脫，磁性分離至上清澄清，所得上清即為純化后的DNA的液態樣品，所述洗脫緩沖液為水或pH＝7.0～9.0的TE緩沖液。

上述方法還包括金磁微粒的預處理步驟：為了去除影響DNA吸附的游離鐵氧化物，在金磁微粒與含有DNA的液態樣品混合前，先用預處理緩沖液對金磁微粒進行清洗，所述預處理緩沖液為0.1M～1.0M的pH＝6.0～8.5的EDTA溶液。

上述方法還包括金磁微粒的再生步驟：將吸附在金磁微粒表面的DNA洗脫完畢，磁性分離后的金磁微粒可以重復使用或是保存在預處理緩沖液中備用。

上述預處理緩沖液優選0.6M的pH＝7.6的EDTA；偶聯緩沖液優選25％的PEG?8000和2.0M的氯化鈉的混合溶液；清洗緩沖液優選75％的乙醇溶液；洗脫緩沖液優選pH＝7.6的TE緩沖液。

上述裂解液包括堿性裂解液、酸性裂解液、碘化鈉裂解液、胍裂解液或SDS裂解液。

上述堿性裂解液是裂解液I、裂解液II、裂解液III和RNase?A溶液。

上述DNA的液態樣品包括血液、精液、唾液、微生物、植物、質粒、凝膠、PCR液及動物組織。

本發明的優點是：