[發明專利]類人膠原蛋白基因、其不同重復數的同向串聯基因、含有串聯基因的重組質粒及制備方法

有效

• 申請號: 200610098297.5
• 申請日: 2006-12-11
• 公開（公告）號: CN101200718A
• 公開（公告）日: 2008-06-18
• 發明（設計）人: 楊樹林;高力虎;李新柱;儲衛華;鈕小松;沈薇;孟廣榮;唐紅玉
• 申請（專利權）人: 南京理工大學
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12N15/67;C07K14/78;C12N15/63;C12N15/69
• 代理公司: 南京理工大學專利中心
• 代理人: 朱顯國

一技術領域

本發明屬于基因工程技術領域，具體的說涉及一種類人膠原蛋白基因，還涉及該基因的不同重復數的串聯基因，以及含有串聯基因的重組質粒及重組質粒的制備方法。

二背景技術

膠原蛋白(也稱膠原)是動物體中含量最豐富的一類蛋白質家族。膠原蛋白具有很強的生物活性及生物功能，能參與細胞的遷移、分化和繁殖，使結締組織具有機械強度，同時膠原蛋白還能促進細胞生長，具有止血、生物相容性和生物降解性能。基于這些特性，膠原蛋白在燒傷、創傷、眼角膜疾病、保健、美容、矯形、硬組織修復、創面止血、藥物傳遞、緩釋技術等醫藥衛生領域有著廣泛的應用。另外，膠原蛋白也可作為食品添加劑、飼料添加劑、絮凝劑、照相乳膠材料、表面活性劑和固定化酶載體材料等應用于各個工業和實驗室領域。

目前，膠原蛋白的生產主要是利用酸、堿法處理動物來源的組織(豬皮、牛皮、驢皮、魚皮等)，從中提取膠原蛋白。但所得到的產品成分復雜，主要應用于飼料添加及微生物發酵培養基。四川銘讓生物科技有限公司采用生物酶定向剪切技術，生產的膠原蛋白組成穩定，具有生物活性。但以上這些方法得到的膠原蛋白產品都有一定的病毒隱患(如瘋牛病、口蹄疫、豬瘟疫、禽流感等)，特別是應用于人體時易引起異體異種的排異反應，從而限制了膠原蛋白在醫藥方面的應用。

隨著DNA重組技術迅速發展，為了能充分利用膠原蛋白的優良特性，科研工作者開始尋求動物本身以外的膠原蛋白來源。有許多學者利用基因工程技術，選用各種宿主細胞(包括：哺乳動物、昆蟲、酵母、大腸桿菌、轉基因煙草、轉基因鼠、轉基因蠶細胞等)，生產重組人膠原蛋白，產品具有安全性好、重現性好、質量穩定等優點。但是，同樣存在著許多不足和困難。如絹絲腺能分泌人膠原蛋白的轉基因蠶，生產的人膠原蛋白長度僅有真正的人膠原蛋白全長的1/5，且含量只有1％左右。總體來說，表達量不高、生產周期長和培養難度大、成本高是以高等動植物細胞為宿主時普遍存在的問題，且不能滿足產業化、大批量生產的要求。而細菌表達系統普遍存產生的致熱原致使表達產物難以應用于臨床；表達的蛋白常以包涵體形式表達，致產物純化困難；原核表達系統的翻譯后加工修飾體系不完善，表達產物的生物活性較低等不足。

三發明內容

本發明的目的在于提供一種類人膠原蛋白基因Gel。

本發明的目的還在于提供一種類人膠原蛋白基因進行不同重復數同向串聯所獲的基因。

本發明的目的還在于提供一種類人膠原蛋白基因不同重復數同向串聯基因的重組質粒。

本發明的目的還在于提供一種制備上述的不同重復數同向串聯基因重組質粒的方法。

實現本發明目的的技術解決方案：一種類人膠原蛋白基因，其堿基序列如序列表中SEQ?ID?NO：1所示，即

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其核酸長度為322bp。

一種含有上述的類人膠原蛋白基因的重組質粒。

一種對上述的類人膠原蛋白基因進行不同重復數同向串聯所獲的基因。

一種與上述的堿基序列至少有70％同一性的基因。

本發明類人膠原蛋白基因不同重復數同向串聯基因，其堿基序列如序列表中SEQID?NO：2所示，或其堿基序列如序列表中SEQ?ID?NO：3所示，或其堿基序列如序列表中SEQ?ID?NO：4所示，其中SEQ?ID?NO：4編碼的蛋白質的氨基酸序列如序列表中SEQ?ID?NO：5所示。

一種含有上述的類人膠原蛋白基因不同重復數同向串聯基因的重組質粒。

本發明的重組質粒，它是可在宿主中復制和生存的表達質粒。

一種制備上述的不同重復數同向串聯基因重組質粒的方法，包括以下步驟：