[發明專利]類人膠原蛋白基因、其不同重復數的同向串聯基因、含有串聯基因的重組質粒及制備方法

有效

• 申請號: 200610098297.5
• 申請日: 2006-12-11
• 公開（公告）號: CN101200718A
• 公開（公告）日: 2008-06-18
• 發明（設計）人: 楊樹林;高力虎;李新柱;儲衛華;鈕小松;沈薇;孟廣榮;唐紅玉
• 申請（專利權）人: 南京理工大學
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12N15/67;C07K14/78;C12N15/63;C12N15/69
• 代理公司: 南京理工大學專利中心
• 代理人: 朱顯國

1.一種類人膠原蛋白基因，其堿基序列如序列表中SEQ?ID?NO：1所示，即

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其核酸長度為322bp。

2.一種含有權利要求1所述的類人膠原蛋白基因的重組質粒。

3.一種對權利要求1所述的類人膠原蛋白基因進行不同重復數同向串聯所獲的基因。

4.一種與權利要求1或3所述的堿基序列至少有70％同一性的基因。

5.根據權利要求3所述的類人膠原蛋白基因不同重復數同向串聯基因，其堿基序列如序列表中SEQ?ID?NO：2所示，或其堿基序列如序列表中SEQ?ID?NO：3所示，或其堿基序列如序列表中SEQ?ID?NO：4所示，其中SEQ?ID?NO：4編碼的蛋白質的氨基酸序列如序列表中SEQ?ID?NO：5所示。

6.一種含有權利要求3所述的類人膠原蛋白基因不同重復數同向串聯基因的重組質粒。

7.一種含有權利要求5所述的類人膠原蛋白基因不同重復數同向串聯基因的重組質粒。

8.根據權利要求2、6或7所述的重組質粒，它是可在宿主中復制和生存的表達質粒。

9.根據權利要求8所述的重組質粒，真核的表達質粒為pPIC9K或pCDNA3.0，原核的表達質粒為pUC18或pET32。

10.一種制備權利要求6或7所述的不同重復數同向串聯基因重組質粒的方法，包括以下步驟：

①選擇一對同尾酶，使其位于目的基因單體的兩端，即堿基序列如序列表中SEQID?NO：1所示的類人膠原蛋白基因的兩端；設計包含上述同尾酶識別位點的接頭DNA片斷；

②將用上述一對同尾酶酶切得到的目的基因單體進行體外連接；

③步驟②得到的連接產物利用接頭DNA片斷，直接連入已含有目的基因單體的質粒，獲得重復數兩個或兩個以上的重組質粒；

④將步驟③重復數的質粒進行重復數翻倍的連接，獲得含有目的基因單體的重復數較高的重組質粒；

⑤將步驟④重復數較高的重組質粒繼續進行重復數翻倍的連接，構建含有目的基因單體的重復數更高的重組質粒；

⑥將構建好的適當重復數的串聯基因克隆到選定的表達質粒中，獲得可以轉化宿主細胞用于表達的重組質粒。