[發(fā)明專利]單胺氧化酶診斷試劑盒及單胺氧化酶活性濃度測定方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200610097324.7
• 申請日: 2006-10-30
• 公開（公告）號: CN101173897A
• 公開（公告）日: 2008-05-07
• 發(fā)明（設計）人: 王爾中
• 申請（專利權）人: 蘇州艾杰生物科技有限公司
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78;G01N21/25;C12Q1/26;C12Q1/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發(fā)明涉及一種單胺氧化酶診斷試劑盒，同時本發(fā)明還涉及測定單胺氧化酶活性濃度的方法，屬于醫(yī)學檢驗測定技術領域。

背景技術

單胺氧化酶(MAO)測定可分為化學分光光度法、熒光法、免疫抑制法及現在申請專利的酶法。一般多用化學分光光度法，單胺氧化酶反應底物以芐胺(Benzylamine)和對苯甲胺-β-偶氮萘酚，也可應用單胺氧化酶催化胺類釋放出的H₂O₂氧化發(fā)色劑，如10-N-甲基氨基甲酰基-3，7-二甲氨基-10-氫-吩噻嗪(MCDP)。除此之外，單胺氧化酶反應底物還有丁基胺(butylamine)、戊基胺(amylamine)、β-苯乙基胺(b-phenylethylamine)、酪胺(tyramine：3-對羥基苯乙胺3-parahdroxyphenyl?ethylamine)、5-羥色胺(5-hydroxytryptamine)等，丁基胺、戊基胺、β-苯乙基胺約為3-對羥基苯乙胺活性的30％，通常應用苯甲胺作為底物比其他底物的單胺氧化酶活性要高。目前單胺氧化酶測定多用芐胺和對苯甲胺-β-偶氮萘酚為底物，但對苯甲胺-β-偶氮萘酚芐胺法需要用環(huán)乙烷提取，限制了該方法的實用性，且不能應用全自動生化儀分析；芐胺法的原理是芐胺在單胺氧化酶的作用下生成芐醛，然后在強堿性氫氧化鈉的條件下與二硝基苯肼反應，生成醛苯腙，在生化儀上測定也較困難。

熒光法檢測單胺氧化酶是以β-苯乙胺作為底物，其在10~100mg時Km最大，高于芐胺和5-羥色胺的Km值。

免疫學方法是利用單胺氧化酶抗體與單胺氧化酶發(fā)生反應，作用后進行單胺氧化酶同工酶測定。目前應用較多的單克隆抗體是MAO-A3C9、MAO-A4F10、MAO-A7B10、MAO-A7E10和MAO-B1C2等。

發(fā)明內容

本發(fā)明要解決的技術問題是：提出一種利用酶比色法(EnzymaticColorimetric?Method)及酶(偶)聯法(Couple?Reaction)技術，連續(xù)監(jiān)測還原型煙酰胺輔酶(還原型輔酶)在340nm波長處吸光度的變化，得以測定單胺氧化酶活性濃度的方法，同時，本發(fā)明還將給出用以實現該方法的單胺氧化酶診斷試劑盒，采用該試劑盒不僅可以在紫外/可見光分析儀或半、全自動生化分析儀上進行單胺氧化酶活性濃度測定，而且測定速度快、準確度高，因而可以得到切實的推廣應用。

本發(fā)明單胺氧化酶活性濃度測定方法原理如下：

這種方法應用單胺氧化酶(偶)聯NADH過氧化物酶(NADHperoxidase；EC?1.11.1.1；EC?1.11.1.2)酶促反應連續(xù)監(jiān)測法。單胺氧化酶解胺類化合物反應產生過氧化氫，再通過(偶)聯合NADH過氧化物酶的作用，最終將還原型輔酶(在340nm處有吸收峰)氧化成為氧化型輔酶(在340nm處沒有吸收峰)，從而得以測定還原型輔酶在340nm處吸光度下降的速度，通過測量340nm處吸光度下降的速度，可以測算單胺氧化酶的活性濃度大小。

實驗表明，從測定結果的準確性和配制成本的經濟性兩方面綜合考慮，無論是單劑、雙劑還是三劑，如下成分關系的本發(fā)明單胺氧化酶診斷試劑盒較為理想：

緩沖液????????????100mmol/L

穩(wěn)定劑????????????50mmol/L

還原型輔酶????????0.25mmol/L

胺類化合物????????8mmol/L

NADH過氧化物酶????8000U/L

本發(fā)明的單胺氧化酶診斷試劑盒可以是單劑，包括：

緩沖液、穩(wěn)定劑、還原型輔酶、胺類化合物、NADH過氧化物酶。

試劑盒可以是干粉狀態(tài)，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

也可以將上述單劑試劑配成如下雙劑試劑：

試劑1

緩沖液、穩(wěn)定劑、還原型輔酶、胺類化合物。

試劑2

緩沖液、穩(wěn)定劑、NADH過氧化物酶。

還原型輔酶、胺類化合物、NADH過氧化物酶在試劑1或試劑2中的位置可以不限。試劑盒可以是干粉狀態(tài)，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

也可以將上述單劑試劑配成如下三劑試劑：

試劑1

緩沖液、穩(wěn)定劑、還原型輔酶。

試劑2

緩沖液、穩(wěn)定劑、胺類化合物。

試劑3