[發明專利]攜帶質體轉運肽的紫槐二烯合成酶融合基因及應用無效
| 申請號： | 200610095202.4 | 申請日： | 2006-11-14 |
| 公開（公告）號： | CN101074443A | 公開（公告）日： | 2007-11-21 |
| 發明（設計）人： | 廖志華;陳敏;諶容 | 申請（專利權）人： | 西南大學 |
| 主分類號： | C12N15/62 | 分類號： | C12N15/62;C12N15/52;C12N9/00;C12N15/82 |
| 代理公司： | 重慶華科專利事務所 | 代理人： | 康海燕 |
| 地址： | 40071*** | 國省代碼： | 重慶;85 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 攜帶 質體 轉運 紫槐二烯 合成 融合 基因 應用 | ||
1.攜帶質體轉運肽的紫槐二烯合成酶融合基因，其特征在于，利用青蒿芳樟醇合成酶的轉運肽lstp和紫槐二烯合成酶基因ads構建lstp-ads融合基因，融合基因序列為SEQID?NO.1。
2.權利要求1所述的攜帶質體轉運肽的紫槐二烯合成酶融合基因的制備方法，其特征在于具體操作步驟如下：
(1)以青蒿總RNA為模板，用RT-PCR方法擴增lstp，回收產物并進行TA克隆；
(2)以青蒿總RNA為模板，用RT-PCR方法擴增ads，回收產物并進行TA克隆；
(3)分別用AatII/SpeI、AatII/BsteII雙酶切含有lstp的TA克隆質粒和含有ads基因的TA克隆質粒，回收lstp片段和ads片段；
(4)用SpeI/BsteII雙酶切pCAMBIA1304質粒，回收大的載體片段；
(5)混合上述lstp片段、ads片段和pCAMBIA1304載體片段，在T4連接酶催化下進行連接反應，完成在pCAMBIA1304載體上的lstp-ads融合基因的構建,
所述青蒿芳樟醇合成酶的轉運肽lstp的PCR擴增引物如下，其中上游引物引入SpeI酶切位點，下游引物引入AatII酶切位點：
上游引物：5’-cccactagtatggcatcaattagcttatttcc-3’
下游引物：5’-cccgacgtctcttgctagaggacttg-3’
所述青蒿紫槐二烯合成酶基因ads的PCR擴增引物如下，其中上游引物引入AatII酶切位點，并去掉了ads編碼區的起始密碼子ATG，下游引物引入BsteII酶切位點：
上游引物：5’-cccgacgtctcacttacagaagaaaaa-3’
下游引物：5’-cccggtgacctcatatactcataggataaa-3’。
3.攜帶質體轉運肽的紫槐二烯合成酶融合基因的應用，其特征在于，利用攜帶質體轉運肽的紫槐二烯合成酶融合基因lstp-ads的基因序列SEQ?ID?NO.1，獲得青蒿素含量提高的青蒿再生植株。?
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