[發(fā)明專利]肌酐診斷試劑盒及肌酐濃度的測定方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200610085584.2
• 申請日: 2006-06-26
• 公開（公告）號: CN101097197A
• 公開（公告）日: 2008-01-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王爾中
• 申請（專利權(quán)）人: 蘇州艾杰生物科技有限公司
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N21/78;G01N33/50;G01N33/52;C12Q1/00
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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種肌酐診斷試劑盒，同時本發(fā)明還涉及測定肌酐濃度的測定方法，屬于醫(yī)學(xué)檢驗測定技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

測定肌酐主要有化學(xué)測定法(Jaffe法)、酶法、高效液相層析法和毛細(xì)管電泳法等。

化學(xué)測定法——成本低廉，操作簡便，是目前國內(nèi)測定肌酐最常用的方法之一。標(biāo)本中的肌酐與苦味酸鹽作用生成黃紅色的苦味酸肌酐復(fù)合物。此法的缺點是特異性不高，因為維生素C、丙酮、乙酰乙酸、甲基多巴以及高濃度葡萄糖、蛋白質(zhì)和一些抗生素如青霉素G、頭孢西丁、頭孢唑啉等也能與堿性苦味酸反應(yīng)生成紅色。

高效液相層析法(HPLC)——肌酐在弱酸性環(huán)境中帶正電荷，通過陽離子交換層析柱可與其他成分很好分離，在234nm測定其光吸收。此法分析的精密度高、特異性好，但本法不適于大批量臨床標(biāo)本分析，通常僅作為肌酐測定的參考方法，用于評價市售肌酐測定的試劑盒和某些科研目的。

毛細(xì)管電泳法——血清標(biāo)本用高速離心作預(yù)處理，尿液標(biāo)本可用低速離心，除去有形成分，上清液用膠束動電毛細(xì)管電泳分離后測定235nm處吸光度。本法測定線性范圍寬，操作較為簡便，但需用特殊設(shè)備和進(jìn)行血清標(biāo)本的預(yù)處理，臨床常規(guī)使用困難。

酶學(xué)測定法——主要有肌酐脫亞胺酶(Creatinine?deiminase)和肌酐酶(Creatininase)兩大類。檢索發(fā)現(xiàn)，申請?zhí)枮?2139298.6、中請日為2002.11.15的專利申請公開了應(yīng)用酶反應(yīng)產(chǎn)物氧化型煙酰胺輔酶配制的測定試劑。該發(fā)明所指的酶法測定試劑并不加入測定反應(yīng)所需的還原型煙酰胺輔酶或其類似物，而加入其反應(yīng)產(chǎn)物氧化型煙酰胺輔酶或其類似物及其相應(yīng)的生成還原型輔酶所需的酶和底物系統(tǒng)，通過在試劑內(nèi)形成酶-底物-NAD或酶-底物-NADP等慢反應(yīng)系統(tǒng)，將這類氧化型輔酶或其類似物緩慢循環(huán)還原為還原型煙酰胺輔酶或其類似物。當(dāng)被還原的還原型煙酰胺輔酶或其類似物達(dá)到一定的濃度時，該發(fā)明所指的酶法試劑就可達(dá)到測定樣本中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、尿素、氨、肌酐和二氧化碳等的目的。該發(fā)明的特點在于為丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶試劑、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶試劑、尿素養(yǎng)試劑、氨試劑、肌酐試劑和二氧化碳試劑等的測試提供一個內(nèi)源合成丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶試劑、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶試劑、尿素養(yǎng)試劑、氨試劑、肌酐試劑和二氧化碳試劑等反應(yīng)所需要的底物-還原型煙酰胺輔酶。其缺點之一為，這個系統(tǒng)在生成反應(yīng)所需要的還原型煙酰氨輔酶的同時，也抵消了部分丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、尿素、氨、肌酐和二氧化碳等的活性，造成試劑測試的準(zhǔn)確性大大降低。其缺點之二是，該試劑在正式測試前必須事先反應(yīng)一段時間，以便能夠產(chǎn)生足夠的還原型煙酰氨輔酶，這樣一來就造成了緩不濟(jì)急的結(jié)果，給測試帶來很大的不便。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是：提出一種利用酶循環(huán)擴(kuò)增法(Enzymatic?Recycling?Method)、酶比色法(Enzymatic?ColorimetricMethod)及酶聯(lián)法(Couple?Reaction)技術(shù)，計量還原型煙酰胺輔酶(還原型輔酶)在340nm波長處吸光度的變化，得以測定肌酐濃度的方法，同時，本發(fā)明還將給出用以實現(xiàn)該方法的肌酐診斷試劑盒，采用該試劑盒不僅可以在紫外/可見光分析儀或半、全自動生化分析儀上進(jìn)行肌酐濃度的測定，而且測定速度快、準(zhǔn)確度高，因而可以得到切實的推廣應(yīng)用。

本發(fā)明肌酐濃度測定方法原理如下：

肌酐+水+H⁺?肌酐脫亞胺酶?N-甲基海因+氨離子

氨離子+α-酮戊二酸+還原型輔酶?谷氨酸脫氫酶?谷氨酸

?????????????????????????????????????????????+輔酶+水

谷氨酸+水+氧?谷氨酸氧化酶?氨離子+α-酮戊二酸+

??????????????????????????????????????????過氧化氫

這種方法應(yīng)用肌酐脫亞胺酶(Creatinine?deaminase?EC?3.5.4.21)將肌酐酶解產(chǎn)生氨。