[發(fā)明專利]肌酐診斷試劑盒及肌酐濃度的測定方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200610085584.2
• 申請日: 2006-06-26
• 公開（公告）號: CN101097197A
• 公開（公告）日: 2008-01-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王爾中
• 申請（專利權(quán)）人: 蘇州艾杰生物科技有限公司
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N21/78;G01N33/50;G01N33/52;C12Q1/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種酶循環(huán)擴(kuò)增法(Enzymatic?Recycling?Method)的肌酐濃度測定方法，其方法原理如下：

肌酐+水+H⁺?肌酐脫亞胺酶?N-甲基海因+氨離子

氨離子+α-酮戊二酸+還原型輔酶?谷氨酸脫氫酶?谷氨酸

????????????????????????????????????????+輔酶+水

谷氨酸+水+氧?谷氨酸氧化酶?氨離子+α-酮戊二酸+

?????????????????????????????????????過氧化氫

將最終反應(yīng)物置于紫外/可見光分析儀或半、全自動生化分析儀下，檢測主波長340nm吸光度下降的速度，測算出肌酐濃度大小測定結(jié)果。

肌酐脫亞胺酶(Creatinine?deaminase?EC?3.5.4.21)作為作用酶，功能為將肌酐酶解產(chǎn)生氨。

谷氨酸脫氫酶(glutamate?dehydrogenase?EC?1.4.1.2、EC?1.4.1.3或EC?1.4.1.4)、谷氨酸氧化酶(Glutamate?oxidase?EC?1.4.3.7、EC1.4.3.11)作為循環(huán)酶：谷氨酸脫氫酶的酶促作用產(chǎn)生谷氨酸；谷氨酸氧化酶再將谷氨酸再次變回氨及α-酮戊二酸，使氨不斷地被重復(fù)循環(huán)利用。

谷氨酸脫氫酶(glutamate?dehydrogenase?EC?1.4.1.2、EC?1.4.1.3或EC?1.4.1.4)作為顯色酶，使還原型輔酶變成為輔酶，在340nm波長下發(fā)生吸光度下降，從而可以測算出肌酐濃度。

還原型輔酶可以是NADPH、NADH或thio-NADH中的一種。

2.一種肌酐診斷試劑盒，主要成分包括：

緩沖液????????????????40-500mmol/L

穩(wěn)定劑????????????????1-50mmol/L

還原型輔酶????????????0.1-0.35mmol/L

肌酐脫亞胺酶??????????200-50000U/L

谷氨酸脫氫酶??????????2000-500000U/L

谷氨酸氧化酶??????????2000-500000U/L

α-酮戊二酸???????????2-20mmol/L

其特征在于：試劑盒可以是干粉狀態(tài)，在使用前加水溶解后使用；

也可以配制成液體試劑，直接使用。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述肌酐診斷試劑盒，其特征在于：

由緩沖液、穩(wěn)定劑、還原型輔酶、α-酮戊二酸、肌酐脫亞胺酶(Creatinine?deaminase?EC?3.5.4.21)、谷氨酸脫氫酶(glutamatedehydrogenase?EC?1.4.1.2、EC?1.4.1.3或EC?1.4.1.4)、谷氨酸氧化酶(Glutamate?oxidase?EC?1.4.3.7、EC?1.4.3.11)組成單劑試劑。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述肌酐診斷試劑盒，其特征在于：

由緩沖液、穩(wěn)定劑、還原型輔酶、α-酮戊二酸、肌酐脫亞胺酶(Creatinine?deaminase?EC?3.5.4.21)、谷氨酸脫氫酶(glutamatedehydrogenase?EC?1.4.1.2、EC?1.4.1.3或EC?1.4.1.4)、谷氨酸氧化酶(Glutamate?oxidase?EC?1.4.3.7、EC?1.4.3.11)組成雙劑試劑；試劑1，由緩沖液、穩(wěn)定劑、還原型輔酶、α-酮戊二酸、谷氨酸脫氫酶、谷氨酸氧化酶組成；試劑2，由緩沖液、穩(wěn)定劑、肌酐脫亞胺酶組成。α-酮戊二酸、肌酐脫亞胺酶、谷氨酸脫氫酶、谷氨酸氧化酶在試劑1或試劑2中的位置可以不限。