[發(fā)明專利]同型半胱氨酸診斷試劑盒及同型半胱氨酸濃度測(cè)定方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200610085366.9
• 申請(qǐng)日: 2006-06-12
• 公開（公告）號(hào): CN101089595A
• 公開（公告）日: 2007-12-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王爾中
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蘇州艾杰生物科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N21/31
• 分類號(hào): G01N21/31;G01N21/78;G01N33/50;G01N33/52;G01N33/68;C12Q1/00
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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種同型半胱氨酸診斷試劑盒，同時(shí)本發(fā)明還涉及測(cè)定同型半胱氨酸濃度的方法，屬于醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)測(cè)定技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

測(cè)定血漿中同型半胱氨酸的方法有很多種，包括高效液相色譜法(HPLC)、氨基酸分析儀測(cè)定法、離子色譜法、酶聯(lián)免疫分析法(EIA)、毛細(xì)管氣相色譜-質(zhì)譜，熒光偏振免疫分析(FPIA)、電化學(xué)法及酶法等等。

1.高效液相色譜法(HPLC)：是經(jīng)典的參考方法，但其有操作比較復(fù)雜，試驗(yàn)耗時(shí)比較長(zhǎng)，試驗(yàn)數(shù)據(jù)變異比較大的缺點(diǎn)，在臨床應(yīng)用方面逐漸被酶聯(lián)免疫分析法、熒光偏振分析法和酶法所取代。高效液相色譜法是：先使用還原劑使血樣中所有形式的同型半胱氨酸轉(zhuǎn)變成還原形式，然后與熒光劑進(jìn)行衍生生成同型半胱氨酸-熒光物質(zhì)復(fù)合物，將衍生后的樣品進(jìn)行色譜分析。因色譜固定相對(duì)不同物質(zhì)的吸附力不同，因此流動(dòng)相將其洗脫下來的次序也不同，根據(jù)這一原理將樣品中的不同物質(zhì)分開，以熒光檢測(cè)器檢測(cè)洗脫下同型半胱氨酸-熒光物質(zhì)復(fù)合物的熒光強(qiáng)度，將其與標(biāo)準(zhǔn)品/內(nèi)標(biāo)的比值進(jìn)行比較和計(jì)算，就可以測(cè)定血總同型半胱氨酸的水平。

2.酶聯(lián)免疫分析法(EIA)：是臨床上測(cè)定同型半胱氨酸水平的常用方法，其特點(diǎn)是操作比較方便、快捷，重復(fù)性好，方法穩(wěn)定可靠。缺點(diǎn)是大部分操作還是手工操作，比較耗時(shí)等。酶聯(lián)免疫分析法其基本分析原理：先使用酶將血樣中所有形式的同型半胱氨酸轉(zhuǎn)變成S-腺苷-L-同型半胱氨酸，然后加入酶標(biāo)的抗S-腺苷-L-同型半胱氨酸的單克隆或多克隆抗體，采用競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合的原理，將不同水平的標(biāo)準(zhǔn)品與酶標(biāo)抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合，然后以顯色試劑和終止試劑分別進(jìn)行顯色和終止，制作出同型半胱氨酸濃度與發(fā)色強(qiáng)度的標(biāo)準(zhǔn)曲線。樣品也按相同步驟處理，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上就可以查出其同型半胱氨酸的濃度。

3.離子色譜法：主要用于實(shí)驗(yàn)研究，臨床上較少使用。其基本分析原理是色譜分析的一種，主要是其固定相采用離子交換物質(zhì)，根據(jù)其對(duì)不同離子的吸附力不同可將同型半胱氨酸與其它物質(zhì)分開進(jìn)行測(cè)定。

4.毛細(xì)電泳法：主要用于實(shí)驗(yàn)研究，有在臨床使用的報(bào)道。其特點(diǎn)與高效液相色譜方法相似，如其有操作比較復(fù)雜、試驗(yàn)耗時(shí)較長(zhǎng)和試驗(yàn)數(shù)據(jù)變異比較大的缺點(diǎn)。基本分析原理：先使用還原劑使血樣中所有形式的同型半胱氨酸轉(zhuǎn)變成還原形式，然后與熒光試劑進(jìn)行衍生生成同型半胱氨酸-熒光物質(zhì)復(fù)合物，將衍生后的樣品進(jìn)行毛細(xì)電泳分析。將樣品放置于10千伏左右的高壓電場(chǎng)中，因?yàn)楦鞣N物質(zhì)所帶電荷不同，其等電點(diǎn)也不相同，因此其在電場(chǎng)中的遷移速度也就不同，根據(jù)這一原理可將同型半胱氨酸與樣品中的其它物質(zhì)分開，再以熒光檢測(cè)器檢測(cè)同型半胱氨酸-熒光物質(zhì)復(fù)合物的熒光強(qiáng)度，將其與標(biāo)準(zhǔn)品/內(nèi)標(biāo)的比值進(jìn)行比較和計(jì)算，就可以測(cè)定總同型半胱氨酸的水平。

5.熒光偏振法：是臨床上測(cè)定同型半胱氨酸水平的比較好的方法，該方法完全自動(dòng)化儀器分析，具有快速、準(zhǔn)確、方便的優(yōu)點(diǎn)。其基本分析原理：樣品中游離同型半胱氨酸和抗單克隆抗體相結(jié)合的同型半胱氨酸的熒光偏振強(qiáng)度不同，將樣品、標(biāo)準(zhǔn)品與標(biāo)抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合，采用競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合的原理制作出同型半胱氨酸濃度與熒光偏振強(qiáng)度的標(biāo)準(zhǔn)曲線，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上就可以查出其同型半胱氨酸的濃度。

6.酶法：是因應(yīng)市場(chǎng)需求而新開發(fā)出來的測(cè)試方法，目前國(guó)內(nèi)有多項(xiàng)專利申請(qǐng)：CN98807531.8利用同型半胱氨酸酶來測(cè)量樣品中同型半胱氨酸含量；CN200410016789.6利用同型半胱氨酸轉(zhuǎn)甲基酶(E.C.2.1.1.10)及腺苷同型半胱氨酸酶(E.C.3.3.1.1)的循環(huán)擴(kuò)增作用，再加上腺苷脫氨酶、嘌呤核苷磷酸化酶、黃嘌呤氧化酶、過氧化物酶等，或腺苷脫氨酶、谷氨酸脫氫酶等顯色反應(yīng)測(cè)定同型半胱氨酸含量；CN200510053210.8利用L-蛋氨酸γ-裂解酶作用于同型半胱氨酸使之產(chǎn)生硫化氫后再與瑩光化合物DMPD2HCl作用產(chǎn)生熒光，該方法使用全自動(dòng)熒光分析儀測(cè)試，具有快速、準(zhǔn)確、方便的優(yōu)點(diǎn)。其基本分析原理：用基因重組酶將同型半胱氨酸分解，所形成之硫化氫產(chǎn)物再與熒光顯色劑發(fā)生化學(xué)反應(yīng)形成可測(cè)量之熒光化合物。

發(fā)明內(nèi)容