[發(fā)明專利]一種大批量分離制備高純度茶黃素單體的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200610083828.3
• 申請日: 2006-06-01
• 公開（公告）號(hào): CN101081844A
• 公開（公告）日: 2007-12-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 曹學(xué)麗;董銀卯;黃丹鳳;李攀;李挺
• 申請（專利權(quán)）人: 北京工商大學(xué)
• 主分類號(hào): C07D311/74
• 分類號(hào): C07D311/74
• 代理公司: 北京北新智誠知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 郭佩蘭

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及從紅茶提取物中大批量分離制備高純度茶黃素單體的方法。

技術(shù)背景

茶黃素(Theaflavins，TFs)是紅茶中特有的一類多酚類聚合物，它們是在紅茶的發(fā)酵過程中由一對合適的兒茶素氧化聚合而成的。茶黃素在紅茶中的含量很低，大約占干重的2％左右，但是，它們對紅茶的色澤和口感有很重要的影響。近年來的研究表明，茶黃素不僅對紅茶的品質(zhì)有著很大的影響，更重要的是它具有多種與人類健康密切相關(guān)的生物活性，如抗心血管疾病、抗病毒、抗炎、抗氧化、抗腫瘤作用等。目前在紅茶中發(fā)現(xiàn)的茶黃素成分有十幾種，其中主要的有以下四種：茶黃素(TF)、茶黃素-3-單沒食子酸酯(TF-3-MG)、茶黃素-3’-單沒食子酸酯(TF-3’-MG)和茶黃素-3，3’-雙沒食子酸酯(TFDG)。其中茶黃素-3-沒食子酸酯(TF-3-MG)和茶黃素-3’-沒食子酸酯(TF-3’-MG)是兩種同分異構(gòu)體。其結(jié)構(gòu)如式1所示。

式1

Theaflavin?R＝R′＝H

Theaflavin-3-O-gallate?R＝gallate，R′＝H

Theaflavin-3′-O-gallate?R′＝gallate，R＝H

Theaflavin-3，3′-di-O-gallate?R＝R′＝gallate

A：茶黃素(theaflavin，TF)

B：茶黃素-3-單沒食子酸酯(theaflavin—3—O-monogallate，TF-3-MG)

C：茶黃素-3’-單沒食子酸酯(theaflavin—3’—O-monogallate，TF-3’-MG)

D：茶黃素-3，3’-雙沒食子酸酯(theaflavin—3，3’—O-digallate，TFDG)

對茶黃素單體成分的藥理活性的深入研究對茶黃素的分離制備方法提出了更高的要求，其中優(yōu)以TF-3-MG和TF-3’-MG的分離最為困難，目前還未見有特效的分離方法報(bào)道。文獻(xiàn)報(bào)道的茶黃素的分離制備方法主要有兩種，即SephadexLH-20凝膠柱層析法或高速逆流色譜法。就這兩種方法而言，凝膠柱層析法制備量較大，但所需時(shí)間較長，溶劑消耗量大；而高速逆流色譜法分離效率較高，但制備量不及柱層析。目前文獻(xiàn)中報(bào)道的這兩種方法主要是用于小制備量分離(幾百毫克上樣量)。對于上述四種主要的茶黃素而言，總的來說，TF和TFDG比較容易與其它茶黃素成分分離，而兩種TF—MG之間的分離一直以來具有很大的挑戰(zhàn)性，單純使用上述任何一種方法都只能實(shí)現(xiàn)其部分分離。在以大量制備分離為目的時(shí)，隨著上樣量的增大，兩者的分離選擇性更差，純化難度更大。因此，高純度茶黃素單體的大制備量分離一直以來具有較大困難。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種從茶黃素粗提物中分離制備了十克至幾十克高純度的茶黃素單體的方法，該方法制備量大，產(chǎn)物純度高，時(shí)間短，溶劑消耗量少。

為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用的分離方法及步驟如下：

1、首先根據(jù)擬裝填的柱床高度和直徑，計(jì)算稱取一定量的凝膠柱填料，用洗脫液進(jìn)行溶脹。采用濕法裝柱，裝好的凝膠柱應(yīng)均勻、無氣泡。本方法中的凝膠填料優(yōu)選Sephadex?LH-20；洗脫液可以采用無水乙醇、50—95％乙醇水溶液或30—70％的丙酮水溶液。

2、取一定量的紅茶粗提物，用洗脫液溶解后上樣。根據(jù)上樣后凝膠柱上的顏色段，分段收集。將所收集的的流分經(jīng)HPLC檢測后，將其中只含有TF的第一段F0以及只含有TFDG的最后一段Fn+1分別收集，濃縮干燥后再用凝膠柱層析和高速逆流色譜純化。而含有TF—3—MG和TF—3‘—MG的中間色段根據(jù)其中TF—3—MG和TF—3‘—MG的相對含量的不同，分五個(gè)部分收集，分別為F1、F2、F3、F4、…Fn(按洗脫順序先后排列)。重復(fù)上樣多次，使F1、F2、F3、F4、…Fn得到富集，濃縮干燥。

其中，n的數(shù)量可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要作調(diào)整，n大時(shí)，分段更細(xì)，但后續(xù)工作量加大。

3、將由粗樣分離所得的TF-3’-MG相對含量在50％以上的級(jí)分分別再上凝膠柱進(jìn)行分離，將反復(fù)分離富集得到的TF-3’-MG相對含量在90％以上的級(jí)分用HSCCC進(jìn)一步純化，去除其中少量的TF-3-MG和其它雜質(zhì)。