[發明專利]N(2)－L－丙氨酰－L－谷氨酰胺的制備方法

無效

• 申請號: 200610076056.0
• 申請日: 2006-04-25
• 公開（公告）號: CN101062938A
• 公開（公告）日: 2007-10-31
• 發明（設計）人: 范永軍
• 申請（專利權）人: 福建三愛藥業有限公司
• 主分類號: C07K1/02
• 分類號: C07K1/02;C07K5/062
• 代理公司: 北京中恒高博知識產權代理有限公司
• 代理人: 夏晏平

技術領域

本發明涉及N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺的制備方法。

背景技術

谷氨酰胺(Gln)是人體內游離氨基酸池和血漿中含量最豐富的氨基酸。人體內約80％的谷氨酰胺分布在骨髂肌，其濃度是血漿的30倍。腸道細胞消耗的能量主要來源于骨骼肌中釋放的谷氨酰胺。盡管在正常情況下谷氨酰胺為非必需氨基酸，但對于危重和營養不良患者，谷氨酰胺為條件必需氨基酸。在諸如手術、創傷膿毒癥等危重情況下，細胞內的谷氨酰胺濃度降低，體內谷氨酰胺將很快耗竭。體內谷氨酰胺池的耗竭會導致小腸上皮細胞的萎縮，并可能損害腸屏障功能，促進細菌移位。盡管給危重和營養不良患者補充谷氨酰胺在生理上具有必要性，但由于谷氨酰胺在高溫消毒和存儲時不穩定，故尚無可供臨床應用的商品。雖然可通過在輸注商用氨基酸溶液時加入結晶氨基酸的方式提供游離谷氨酰胺，然需每日在藥房無菌間配液及膜濾過消毒。谷氨酰胺的不穩定性可通過使用穩定且易溶的丙氨酰——谷氨酰胺雙肽加以克服。

N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺(二肽)可在體內分解為谷氨酰胺和丙氨酸，這一特性使經由腸外營養輸液補充谷氨酰胺成為可能。二肽分解釋放出的氨基酸作為營養物質各自儲存在身體的相應部位并隨機體的需要進行代謝。對許多病癥應用腸外營養支持時，病人均可能出現體內谷氨酰胺的耗減，而二肽的輸注可阻止這一癥狀的出現，且二肽可被機體快速有效地分解為丙氨酸和谷氨酰胺，被機體利用，而無任何毒副反應。

根據現有的文獻資料，它的合成通常可以通過以下幾條路線來實現：

路線一：用酰氯與谷氨酰胺的氨基生成肽鍵；

路線二：用氨基保護后的活性酯與谷氨酰胺的氨基生成肽鍵；

路線三：用α-Amino?Acid?NCA’s(N-Carboxy?Anhydrides)與谷氨酰胺的氨基生成肽鍵。

其中，路線一是用(D)-Alpha-鹵素、烷基磺酰氧或芳香基磺酰氧取代的丙酸為起始原料，與氯化亞砜反應生成酰氯，再與L-谷氨酰胺生成酰胺，最后用氨取代鹵素，經過構型的翻轉，從而得到均為L-構型的二肽，參見美國專利US5380934。

路線二是用Cbz、Boc、Fmoc氨基保護的L-丙氨酸為起始原料，與N-羥基琥珀酰亞胺經DCC脫水，從而形成活性酯，該活性酯再與L-谷氨酰胺生成酰胺，最后脫氨基保護，從而得到均為L-構型的二肽，參見美國專利US4474754、歐洲專利EP0087750。

路線三是用L-丙氨酸為起始原料，與氯甲酸三氯甲酯環合后生成α-Amino?Acid?NCA’s(N-Carboxy?Anhydrides)，再與L-谷氨酰胺生成酰胺，在酸性條件下脫去一分子二氧化碳，從而得到均為L-構型的二肽；比較這三條路線，路線二中用到價格比較昂貴的N-羥基琥珀酰亞胺和DCC；路線一的原料來源方便，但原料價格高，生產二肽不經濟。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種工藝簡單、操作方便且污染少的N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺制備方法。

為解決上述技術問題，本發明N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺的制備方法如下：

I、制備的步驟如下：

1、前體酸鉀制備

在制備前體酸鉀的反應器中，分別加入32.5g?KOH、45.0g丙氨酸和100ml乙醇；室溫攪拌10分鐘，溶解，得一清亮溶液；然后滴加73.0～90.0ml的N端保護基，回流60分鐘，反應器內溫度在68℃～84℃之間；所述的N端保護基是乙酰乙酸乙酯或乙酰丙酮；

改回餾為蒸餾回收乙醇，反應器內溫度為88℃時，加甲苯150ml繼續蒸餾，反應器內溫度為78℃時，加甲苯100ml，攪拌蒸餾甲苯50ml，很快析出白色結晶，然后補加甲苯蒸出250ml，攪拌回餾帶水，蒸餾甲苯及水共130ml，分出23ml水，攪拌蒸餾直到反應器內溫度達110℃，并有結晶析出，常溫下冷卻10～12小時；

抽濾后，再用丙酮500ml分兩次洗滌，抽干得白色結晶性粉末。置70℃真空干燥箱中干燥6小時，然后用二氧六環重結晶，制得前體酸鉀；

2.混合酸酐制備

在混合酸酐反應器中，加入上述步驟制得的24g前體酸鉀；加入400ml丙酮；攪拌冰鹽浴冷卻至反應液溫度低于-15℃時，滴加11.0～12.5ml氯甲酸酯，控制反應溫度低于-15℃，繼續攪拌約30分鐘，制得混合酸酐，待用；所述氯甲酸酯是氯甲酸乙酯或氯甲酸三氯甲酯；

3.谷氨酰胺鈉鹽制備