[發明專利]一種基于磁性納米粒子聚合酶鏈式反應(PCR)的單核苷酸多態性(SNP)高通量分型方法

無效

• 申請號: 200610032203.4
• 申請日: 2006-09-06
• 公開（公告）號: CN101139636A
• 公開（公告）日: 2008-03-12
• 發明（設計）人: 劉洪娜;何農躍;李松;賀全國;陸祖宏;林琳
• 申請（專利權）人: 劉洪娜;何農躍
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種基于磁性納米粒子PCR的單核苷酸多態性分型方法，包括下述步驟：

(a)選取待檢測功能SNP位點。設計一對擴增引物(其中一條5’端經過標記)和兩條帶有標記物的野生和突變檢測探針。

(b)將一端標記的引物固定在標記物修飾的磁性納米粒子上，在含有自由引物、dNTP、聚合酶和模板DNA的體系中進行PCR反應，直接在磁性納米粒子表面擴增出包含有待測SNP位點的靶序列，構成磁性納米粒子-DNA復合物。

(c)磁性納米粒子-DNA復合物變性后，與兩條等位基因特異性探針雜交。通過控制雜交溫度，使野生純合型樣本只與野生探針匹配，突變純合型樣本只與突變探針匹配，雜合型樣本與兩種探針均匹配。

(d)將雜交有檢測探針的磁性納米粒子經洗滌、變性、磁分離后，通過檢測變性下來探針上的標記物來實現對樣本的SNP分型。

2.根據權利要求1所述的SNP分型方法，其特征在于所述步驟中靶序列是將在一條引物固定在的磁性納米粒子上，通過PCR直接在磁性納米粒子上擴增出來的。

3.根據權利要求1、2所述的SNP分型方法，其特征在于所述步驟(b)中標記引物的方法可以是生物素或者氨基，修飾磁性納米粒子的標記物相對應是親合素、醛基，通過生物素-親合素或者氨基-醛基之間的共價結合，將引物固定在磁性納米粒子上。

4.根據權利要求1、2所述的SNP分型方法，其特征在于所述的磁性納米粒子-DNA復合物與檢測探針在液相體系中完成雜交。

5.根據權利要求1、4所述的SNP分型方法，其特征在于SNP位點分型所使用的兩條檢測探針，其可以分別帶有兩種不同熒光標記物，也可以帶有相同標記物，如納米金、化學發光物、熒光標記物等。

6.根據權利要求1、5所述的SNP分型方法，其特征在于所述步驟(d)中檢變性下來的探針上的標記物的方法選熒光檢測法、化學發光法、銀染法中的一種。