[發明專利]一種鋅指蛋白DPZF基因敲除小鼠模型及用途

無效

• 申請號: 200610028218.3
• 申請日: 2006-06-27
• 公開（公告）號: CN101096684A
• 公開（公告）日: 2008-01-02
• 發明（設計）人: 章衛平
• 申請（專利權）人: 章衛平
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N5/10;A01K67/027;C07K14/435;A61K38/17;A61P3/08;A61P27/16
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司
• 代理人: 徐迅

技術領域

本發明涉及轉基因技術領域，更具體地涉及一種鋅指蛋白DPZF基因敲除動物模型的建立和功用。

背景技術

鋅指蛋白是一類廣泛存在于動植物及人類的DNA結合蛋白。由于其選擇性地結合各種DNA和RNA序列的特性，它在基因的表達調控、細胞分化、配子的形成和胚胎發育等生命過程中起著十分重要的作用。自1985年開始，科學工作者在這方面進行了大量的研究.目前發現，研究的大多數鋅指蛋白是基因調控因子.它們不僅可結合于DNA，RNA和DNA-RNA雜交體，還能與其他鋅指蛋白結合，控制生物體中基因的轉錄、翻譯和蛋白的合成。

至今為止，已發現的鋅指結構有10種，鋅指蛋白DPZF是和BCL-6同源的POZ鋅指蛋白亞家族的新成員。目前，對鋅指蛋白DPZF的了解極其有限，也缺乏必要的手段。

因此，本領域迫切需要提供一種鋅指蛋白DPZF基因敲除動物模型，它可為深入了解鋅指蛋白DPZF的生物學功能提供有效的研究途徑和方法，并由此提供其應用。

發明內容

本發明旨在提供一種鋅指蛋白DPZF基因敲除動物模型。

本發明的另一個目的是提供上述鋅指蛋白DPZF基因敲除動物模型的用途。

在本發明的第一方面，提供了一種產生鋅指蛋白DPZF基因敲除非人哺乳動物模型的方法，它包括步驟：

(i)提供一線性化的基因打靶載體構建物，該構建物從5’至3’依次含有(a)DPZF打靶短臂、正選擇基因，(b)自殺基因，(c)DPZF打靶長臂；

(ii)通過體外轉染胚胎干細胞(ES細胞)、篩選與打靶載體發生同源重組的陽性ES細胞克隆，經顯微注射技術入非人哺乳動物囊胚中；

(iii)將步驟(ii)得到的囊胚植入假孕的非人哺乳動物的子宮；

(iv)產生鋅指蛋白DPZF基因敲除非人哺乳動物模型。

在另一優選例中，還包括步驟：

(v)對步驟(iv)獲得的鋅指蛋白DPZF基因敲除動物進行鑒定。

在另一優選例中，還包括步驟：

(vi)使獲得的鋅指蛋白DPZF基因敲除動物進行交配建系，獲得子代。

在另一優選例中，所述的正選擇基因是Neo、hph、或gpt。

在另一優選例中，所述的自殺基因是HSV-tk、胞嘧啶脫氨酶基因、或VIV-TK。

在另一優選例中，所述的非人哺乳動物是小鼠、大鼠、兔或猴。

在另一優選例中，所述的非人哺乳動物是小鼠。

在另一優選例中，所述的轉基因構建物基因刪除外顯子。

在另一優選例中，所述的轉基因構建物不含啟動子。

在另一優選例中，所產生的是鋅指蛋白DPZF編碼第91位至602位氨基酸缺失的非人哺乳動物。

在本發明的第二方面，提供了一種用上述方法產生的鋅指蛋白DPZF基因敲除非人哺乳動物模型。

在本發明的第三方面，提供了一種用上述方法產生的鋅指蛋白DPZF基因敲除非人哺乳動物模型的用途，所述的動物模型可用于篩選(a)促進生長發育，(b)促進聽力，或(c)改善血糖代謝的藥物。

在本發明的第四方面，提供了一種鋅指蛋白DPZF的用途，它可用于制備治療(a)促進生長發育，(b)促進聽力，或(c)改善血糖代謝的藥物。

在另一優選例中，可以將鋅指蛋白DPZF及其所在的上、下游生物信號轉導通路作為治療生長發育障礙、聽力障礙和肥胖、高血糖等疾病的藥物干預靶點。

據此，本發明提供了一種鋅指蛋白DPZF基因敲除動物模型，有效地揭示了鋅指蛋白DPZF的生物學功能，并由此提供了鋅指蛋白DPZF基因敲除動物模型及鋅指蛋白DPZF的用途。

附圖說明

圖1是鋅指蛋白DPZF基因打靶載體及其與基因組進行同源重組的示意圖。

圖2顯示了鋅指蛋白DPZF基因敲除小鼠基因型Southern(DNA印跡雜交)鑒定；

其中4、5、8、11表示DPZF基因敲除雜合子，3、6、7、9、10表示野生型基因；

其中+/-表示DPZF基因敲除雜合子，-/-表示DPZF基因敲除純合子。

圖3顯示了鋅指蛋白DPZF基因敲除小鼠生長發育障礙的情況；

左邊為出生后3周的鋅指蛋白DPZF基因敲除小鼠，右邊為同齡的正常對照小鼠。

圖4顯示了鋅指蛋白DPZF基因敲除小鼠對不同頻率的聲波刺激喪失反應的情況。

圖5顯示了鋅指蛋白DPZF在正常小鼠內耳中表達的免疫組化染色結果。

圖6顯示了鋅指蛋白DPZF基因敲除小鼠低血糖的情況及其機理分析，