[發明專利]使用成骨細胞與生物基質的混合物的成骨用組成物及其制造方法

無效

• 申請號: 200580049966.3
• 申請日: 2005-06-27
• 公開（公告）號: CN101227915A
• 公開（公告）日: 2008-07-23
• 發明（設計）人: 張在德;樸炫信;張晶皓;鄭修真;李璽邦;高暢權
• 申請（專利權）人: 世源世龍股份有限公司
• 主分類號: A61K35/28
• 分類號: A61K35/28
• 代理公司: 北京挺立專利事務所
• 代理人: 皋吉甫

技術領域

本發明涉及一種使用成骨細胞和生物基質混合物的成骨用組成物及其制備方法，尤其涉及一種用于骨缺陷或者所需區域成骨移植的使用成骨細胞和生物基質混合物的成骨用組成物及其制備方法。

背景技術

根據世界健康組織(World?Health?Organization，WHO)的報道，超過半數的65歲以上老人遭受慢性骨病的痛苦，并且與骨質疏松有關的骨折發生數量是過去十年的2倍。這些數據與40％的50歲及50歲以上的女性相似。

在美國，每年大概有560萬人經歷骨折，其中的310萬人進行外科手術。根據國際醫學數據(Medical?Data?International，MDI)的統計報道，1995年共實施了426,000例骨移植手術。全球一年用于骨移植的費用大約為8億美元。僅僅1995年一年，骨移植包括58％的自體移植，34％的異體移植及8％的合成材料移植。

通常，簡單的(封閉的)骨折用石膏固定幾個星期就可以完全愈合，但是嚴重的骨折或者骨缺陷需要骨移植。

然而，自體移植的缺點是在骨接受區域會引起強烈的疼痛，在骨移植手術后需要很長一段時間恢復，并且保護用于骨移植的供體部位是十分困難的。

同時，異體移植也要經歷致命的缺點，例如滅菌過程造成的骨強度變弱，出現移植排異反應，被傳染性疾病傳染，例如乙型肝炎和艾滋病。

另外一種骨移植可用方法，在具有生物活性的金屬或者非生物活性的陶制材料上涂一層在整形外科手術中廣泛應用的支撐材料，但是由于一些問題在骨移植中應用金屬是十分困難的，例如金屬的腐蝕性問題，覆蓋金屬陶瓷表面，骨及被移植部位表面劇烈形成纖維性組織。

至于骨形成因素，盡管從1952年Urist和Mclean公布成骨蛋白對骨形成的影響以來有大量關于不同因素的研究，但是其生產過程是非常復雜和昂貴的，并且低效，這導致了低產以及最終有限的臨床應用。

同時，骨髓注射是基于Huggins(1931)，Friedenstein(1973)，和Ashton(1980)聲明的技術，其中來自骨髓的骨原細胞促進并推動骨形成。骨髓注射在治療骨折時通常單獨使用，但也在骨移植中使用。與其它骨移植技術不同，這種骨髓注射供體不需切開皮膚，十分有利于保護供體，沒有并發癥或其它不利影響。

其后，盡管大量臨床應用病例獲得好結果被報道，骨髓注射的缺點是不具有健全的理論基礎，獲得的相當一部分結果間不具有一致性，從一個位置收集的骨髓數量是有限的，骨髓中的骨原細胞的數量是相當有限的。

這樣，一種新的骨形成和移植方法，通過培養、擴增骨原細胞獲得足夠數量的成骨細胞，將培養的細胞與生物基質混合，將獲得的混合物注射到成骨區域，這是一種高效的方法，有重大優勢和有益效果，與傳統自體移植或異體移植和骨髓注射相比，這種骨再生治療方法在組織工程學領域獲得了大量關注。

因此，基于上述由移植或者傳統骨移植技術帶來的問題，本發明的一個目的在于提供一種使用成骨細胞和生物基質混合物的成骨用組成物及其制備方法，通過向骨結合的部位注射成骨細胞和纖維蛋白的混合物，無臨床移植排異，通過注射適于一定程度的組成物可以獲得有效、快速的骨結合，以致減輕由于注射的成骨細胞從骨結合區域逃逸而造成的非必要區域骨組織形成及成骨細胞通過血流增生的問題，這個問題是由于注射成骨細胞懸浮液而造成的。

發明內容

與本發明的一個方面一致，上述及其它目的通過提供一種制備用于骨結合的組成物的方法來實現，包括：

從骨組織中分離成骨細胞及其前體細胞，在DMEM(Dulbecco’s?ModifiedEagle’s?Medium)或者α-MEM(Minimum?Essential?Medium，AlphaModification)中培養/增生分離的成骨細胞及其前提細胞，制備成骨細胞懸浮液；

及將獲得的成骨細胞懸浮液與生物基質混合制備成骨細胞治療劑。

其中，治療劑的制備步驟進一步包括：將成骨細胞混合溶液與凝血劑混合，所述成骨細胞懸浮液混有生物基質。

其中，混合步驟包括：成骨細胞混合溶液與10至100IU/mL的作為凝血劑的凝血酶混合；含有凝血酶的混合溶液與20至100mg/mL的作為凝血劑的血纖蛋白原混合。

其中，生物基質是膠原蛋白、羥磷灰石或者二者的混合物。

其中，膠原蛋白向成骨細胞懸浮液中的加量為67μg/mL至20mg/mL，羥磷灰石向成骨細胞懸浮液中的加量為30μg/mL至3.4mg/mL。