[發明專利]利用發光體K－37的脂蛋白測定

無效

• 申請號: 200580047864.8
• 申請日: 2005-12-12
• 公開（公告）號: CN101133329A
• 公開（公告）日: 2008-02-27
• 發明（設計）人: 加雷斯·羅伊斯頓·瓊斯;戴維·托馬斯·克拉克
• 申請（專利權）人: 科學技術設備委員會
• 主分類號: G01N33/92
• 分類號: G01N33/92;G01N35/00;G01N21/64
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責任公司
• 代理人: 王旭

本發明涉及用于鑒別樣品混合物中不同類別脂質分子的測定系統。特別地，本發明涉及確定血漿或血清中特別是脂蛋白濃度的方法。本發明還涉及用于實施所述方法的裝置。

脂質是有生命生物中存在的多種組的有機化合物。它們在水中是不溶的，但是可溶于有機溶劑。將脂質廣泛分類成兩個類別：(i)復雜脂質；和(ii)簡單脂質。復雜脂質是長鏈脂肪酸的酯并且包括甘油酯類、糖脂類、磷脂類、膽固醇和蠟。不含有脂肪酸的簡單脂質，包括類固醇(例如，膽固醇)和萜類。

脂質可以與蛋白質結合形成脂蛋白，其形式為其中諸如膽固醇和甘油三酯的脂質在血液和淋巴中被輸送。血漿中發現的脂蛋白屬于三個主要分類：(i)高密度脂蛋白(HDL)，(ii)低密度脂蛋白(LDL)，和(iii)極低密度的脂蛋白(VLDL)，以及中間密度脂蛋白(IDL)。為了簡潔，在這里使用術語“血清”，但是涉及“血清”應當解釋為涉及血清或血漿。

充分記載的是，在血漿中多種脂蛋白的濃度和動脈粥樣硬化風險之間存在有力的關系，即有害斑塊在血管壁上的發展可以導致心臟病發作。同樣已知，不同類別的脂蛋白(HDL、LDL和VLDL)在動脈粥樣硬化中各自起不同的作用。例如，將HDL認為是抗致動脈粥樣化的(anti-atherogenic)，而已知LDL是高度致動脈粥樣化的(它攜帶的膽固醇與動脈粥樣硬化的發展密切相關)。

因此，關于多種脂質成分的每一種(即脂蛋白)在血液中的相對濃度的知識，將是有利的，因為這將幫助臨床醫生治療具有這些不適當的脂質血液濃度的患者。應當理解，具有患者脂蛋白分布的知識對于臨床醫生將是最有利的。

已經開發了用于確定血液中一些脂質成分濃度的測定。這樣的測定通常涉及首先從患者取血樣，然后將其送到檢驗實驗室用于分析。這樣的測定利用昂貴的裝置進行，并且出于計算原因需要相當長的時間以產生結果。這耽誤治療。而且，所述測試是復雜的，并且因此是昂貴的。另外，在實驗室中使用的裝置不容易便攜，并且因此不能由GPs或護士在出診時使用，或者甚至不能作為家用測試試劑盒使用。最近已經開發了試圖在“治療點(point?of?care)”復制實驗室測定的裝置，但是這些已經證明是昂貴的并且需要熟練的使用者操作。因此，存在提供用于分析血清中脂蛋白分布的改進方法的需要。

血清是多種蛋白質的復雜混合物，并且雖然分離并直接測量不同類別脂蛋白濃度的方法是已知的，但是這樣的方法是復雜而昂貴的。用于確定血清的脂蛋白濃度的測定實施例公開在WO?01/53829A1中。該文件涉及特別的有機發光體，4-二甲基氨基-4′-二氟甲基-磺酰-苯亞甲基-苯乙酮(DMSBA)，作為熒光探針的使用。所述探針的公式，確定為K-37，給定如下：-

探針K-37在水中不發光，但是在脂蛋白水溶液諸如血清中是高度發光的。特別是，熒光強度高度依賴于血清的脂蛋白含量并因而可以將K-37用作熒光探針以測量可能存在的脂蛋白濃度，即當結合到脂蛋白的脂質并在適當輻射波長激發時K-37發熒光。因此，脂蛋白混合物的時間分辨(time-resolved)熒光衰減的測量可用于直接產生關于存在于那個混合物中的不同脂蛋白(LDL、和VLDL)的相對濃度的信息。

然而，利用K-37時間分辨熒光衰減的問題是它的測量是復雜的并且需要昂貴的裝備。而且，它涉及所產生數據的高度專業的計算機分析，其對于正確解釋可能是耗時的。因此，當希望快速決定治療過程而不是花費時間使用時間分辨熒光衰減以提供脂蛋白分析時，使用K-37時間分辨的熒光衰減以確定血液中脂質成分濃度對于臨床醫生具有嚴重的限制。

因此，即使存在通過利用具有探針K-37的時間分辨熒光分析而有效確定樣品中特定脂蛋白濃度的方法，應當理解該方法具有許多限制。

因此本發明實施方案的目的是用現有技術排除或減輕所述問題，并且提供用于確定樣品中脂蛋白濃度的改進方法。進一步的目的是提供用于實施所述方法的裝置。

本發明人開發了基于使用K-37測量生物分子中脂蛋白的簡化測定。為了利用K-37熒光測量確定血樣中總脂蛋白(即HDL、LDL、和VLDL)的濃度，本發明人認識到將優選，來自結合到多種脂蛋白類別的探針物質的熒光應答必須基本上對于給定的總脂蛋白濃度，即總脂蛋白濃度是相同的，不考慮它的組成(即樣品中HDL∶LDL∶IDL∶VLDL的比例)。因此，本發明人相信，將優選來自探針物質的熒光強度響應在脂蛋白分子的濃度范圍內也應當基本上是線性的，所述脂蛋白分子的濃度范圍是從臨床測試中將遇到的樣品所預期的。