[發明專利]利用熒光測量產生脂質分布的測定

無效

• 申請號: 200580047858.2
• 申請日: 2005-12-12
• 公開（公告）號: CN101137907A
• 公開（公告）日: 2008-03-05
• 發明（設計）人: 加雷斯·羅伊斯頓·瓊斯;戴維·托馬斯·克拉克
• 申請（專利權）人: 科學技術設備委員會
• 主分類號: G01N33/92
• 分類號: G01N33/92;G01N35/00;G01N21/64
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責任公司
• 代理人: 王旭

本發明涉及用于區別樣品混合物中不同類別脂質分子的測定系統。特別地，本發明涉及確定血漿或血清中特定的脂質濃度的方法，以便產生脂質分布。本發明還涉及實施所述方法所用的裝置。

脂質是有生命生物中存在的多種組的有機化合物。它們在水中是不溶的，但是可溶于有機溶劑。將脂質廣泛分類成兩個類別：(i)復雜脂質；和(ii)簡單脂質。復雜脂質是長鏈脂肪酸的酯并且包括甘油酯類、糖脂類、磷脂類、膽固醇和蠟。不含有脂肪酸的簡單脂質，包括類固醇(例如，膽固醇)和萜類。

脂質可以與蛋白質結合形成脂蛋白，其形式為其中諸如膽固醇和甘油三酯的脂質，在血液和淋巴中被輸送。血漿中發現的脂蛋白屬于三個主要分類：(i)高密度脂蛋白(HDL)，(ii)低密度脂蛋白(LDL)，和(iii)極低密度的脂蛋白(VLDL)，以及中間密度脂蛋白(IDL)。為了簡潔，在這里使用術語“血清”，但是涉及“血漿”應當解釋為涉及血漿或血清。

充分記載的是，在血漿中多種脂蛋白的濃度和動脈粥樣硬化風險之間存在有力的關系，即有害斑塊在血管壁上的發展可以導致心臟病發作。同樣已知，不同類別的脂蛋白(HDL、LDL和VLDL)在動脈粥樣硬化中各自起不同的作用。例如，將HDL認為是抗致動脈粥樣化的(anti-atherogenic)，而已知LDL是高度致動脈粥樣化的(它攜帶的膽固醇與動脈粥樣硬化的發展密切相關)。VLDL被認為是輕微致動脈粥樣硬化的，而且在女性中更顯著。

因此，關于多種脂質成分的每一種(膽固醇，甘油三酯和脂蛋白，特別是LDL)在血液中的相對濃度的知識將是有利的，因為這將在治療具有這些不適當的脂質血液濃度的患者中幫助臨床醫生。應當理解，具有患者脂質分布的知識對于臨床醫生將是最有利的。

已經開發了用于確定血液中一些脂質成分濃度的測定。這樣的測定通常涉及首先從患者取血樣，然后將其送到臨床實驗室用于分析。這樣的測定必須利用昂貴的裝置進行，并且需要相當長的時間以產生結果。這耽誤治療。而且，所述測試是復雜的，并且因此是昂貴的。另外，在實驗室中使用的裝置不容易便攜，并且因此不能由GPs或護士在出診時使用，或者甚至作為家用測試試劑盒使用。已經開發了試圖在“治療點(point?of?care)”再生實驗室測定的裝置，但是這些已經證明是昂貴的并且需要熟練的使用者操作。因此，存在提供用于分析血清中脂質分布的改進方法，以及用于實施這些方法的簡單并相對便宜設備的需要。

血清是多種蛋白質的復雜混合物，并且雖然分離并直接測量不同類別脂蛋白濃度的方法是已知的，但是這樣的方法是復雜而昂貴的。因此，廣泛用于臨床實驗室的脂蛋白測定方法的一種方法是間接方法，其中重要的LDL濃度是利用Friedewald方程由總膽固醇濃度、甘油三酯濃度和HDL濃度的測量計算的：-

(CH-LDL)＝CH-(CH-HDL)-TG/5

其中CH是總膽固醇濃度、(CH-LDL)是膽固醇LDL濃度、(CH-HDL)是膽固醇HDL濃度，并且TG是甘油三酯濃度(包括背景水平的游離甘油)。

在可以計算LDL濃度以前，必須首先確定HDL、總膽固醇和甘油三酯的濃度。應當理解HDL、膽固醇或甘油三酯濃度測量中的任何誤差將在LDL濃度的計算中復合。另外，常規的甘油三酯濃度測量不區別甘油三酯和游離甘油，其濃度可以改變，將進一步的誤差引入到LDL濃度的計算中。因而，LDL濃度的計算固有地包括誤差，其可以是非常顯著的。這樣的誤差是在例如監控廣泛使用的LDL減少的治療(諸如飲食、藥物等)的發展中的特別問題，其中必需精確監控相對小的LDL濃度的減少(一般數個百分點的級別)，同時甘油三酯水平可以顯著變化。這在治療具有冠心病史的患者中是特別尖銳的。

測定血清的脂蛋白濃度的備選方法公開在WO01/53829A1中。該文件涉及特別的有機發光體，4-二甲基氨基-4′-二氟甲基-磺酰-苯亞甲基-苯乙酮(DMSBA)，作為熒光探針的使用。所述探針的公式，確定為K-37，給定如下：-

探針K-37在水中不發光，但是在脂蛋白水溶液諸如血清中是高度發光的。特別是，熒光強度高度依賴于血清的脂蛋白含量并因而可以將K-37用作熒光探針以測量可能存在的脂蛋白濃度，即，當結合到脂蛋白的脂質并在適當輻射波長激發時K-37發熒光。因此，脂蛋白混合物的時間分辨熒光衰減的測量可用于直接產生關于存在于那個混合物中的不同脂蛋白(LDL，和VLDL)的相對濃度的信息。