[發明專利]減少含有目的維生素K依賴性蛋白質的組合物中的蛋白質污染物的含量

有效

• 申請號: 200580046486.1
• 申請日: 2005-12-23
• 公開（公告）號: CN101098883A
• 公開（公告）日: 2008-01-02
• 發明（設計）人: J·克拉魯普;T·B·漢森;A·C·阿倫岑;D·E·拉斯馬森;A·博格辛斯;A·斯塔比;H·阿曼迪安;S·班
• 申請（專利權）人: 諾和諾德醫療保健公司
• 主分類號: C07K1/16
• 分類號: C07K1/16;C07K14/745
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所
• 代理人: 胡國群

1.用于減少含有在細胞培養條件下產生的重組目的維生素K依賴 性蛋白質的組合物中蛋白S含量的方法，所述方法至少包括下列步驟：

(A)使第一組合物與能夠結合目的維生素K依賴性蛋白質的固相 材料接觸，和收集因而產生的含有目的維生素K依賴性蛋白質的第二組 合物；和

(B)使第一組合物與攜帶親和配體的固相材料接觸，所述攜帶親 和配體的固相材料能夠結合蛋白S，而目的維生素K依賴性蛋白質不結 合至所述固相并流過色譜柱；和收集因而產生的含有目的維生素K依賴 性蛋白質的第二組合物；和

由此從所述第一組合物到所述因而產生的第二組合物，蛋白S水平 減少至少2倍，所述蛋白S水平表示為相對于目的維生素K依賴性蛋白 質的百萬分率。

2.根據權利要求1的方法，其中目的維生素K依賴性蛋白質是凝 血因子IX多肽。

3.根據權利要求1的方法，其中目的維生素K依賴性蛋白質是凝 血因子X多肽。

4.根據權利要求1的方法，其中目的維生素K依賴性蛋白質是凝 血因子VII多肽。

5.根據權利要求4的方法，其中目的維生素K依賴性蛋白質是野 生型人凝血因子VIIa。

6.根據權利要求4的方法，其中凝血因子VII多肽包含選自P10Q 和K32E的氨基酸置換。

7.根據權利要求1的方法，其中所述蛋白S是倉鼠蛋白S。

8.根據權利要求1-7中任一項的方法，其中蛋白S水平減少至少 5倍，所述蛋白S水平表示為相對于目的維生素K依賴性蛋白質的百萬 分率。

9.根據權利要求1-7中任一項的方法，其中蛋白S水平減少至少 10倍，所述蛋白S水平表示為相對于目的維生素K依賴性蛋白質的百萬 分率。

10.根據權利要求1-7中任一項的方法，其中蛋白S水平減少至少 50倍，所述蛋白S水平表示為相對于目的維生素K依賴性蛋白質的百萬 分率。

11.根據權利要求1-7中任一項的方法，其中蛋白S水平減少至少 100倍，所述蛋白S水平表示為相對于目的維生素K依賴性蛋白質的百 萬分率。

12.根據權利要求1-7中任一項的方法，其中在未純化的細胞培養 物上清液中的蛋白S污染物含量為至少500ppm。

13.根據權利要求1-7中任一項的方法，其中在因而產生的含有目 的維生素K依賴性蛋白質的經純化的組合物中蛋白S污染物的總含量為 至多100ppm。

14.根據權利要求1-7中任一項的方法，其中在因而產生的含有目 的維生素K依賴性蛋白質的經純化的組合物中蛋白S污染物的總含量為 至多50ppm。

15.根據權利要求1-7中任一項的方法，其中在因而產生的含有目 的維生素K依賴性蛋白質的經純化的組合物中蛋白S污染物的總含量為 至多10ppm。

16.根據權利要求1-7中任一項的方法，其中步驟(B)的所述固 相材料攜帶有針對蛋白S的單克隆抗體。

17.根據權利要求1-7中任一項的方法，其中步驟(A)的所述固 相材料攜帶有針對目的維生素K依賴性蛋白質的親和配體。

18.根據權利要求17的方法，其中步驟(A)的所述固相材料攜帶 有針對目的維生素K依賴性蛋白質或其類似物的單克隆抗體。

19.根據權利要求17的方法，其中所述固相材料是對目的維生素 K依賴性蛋白質或其類似物具有親和力的三嗪配體。

20.根據權利要求17的方法，其中步驟(A)的所述固相材料攜帶 有所述目的維生素K依賴性蛋白質的抑制劑。